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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物:CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8(Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件:35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图,求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
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yangnan1987

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:31:37
Marker带很亮证明胶没有问题,而PCR产物杂带很多,说明设计的PCR引物特异性不强,建议你把退火温度提高到65-72℃试试,如果还不能成功,就需要从新设计引物了。
58楼2014-08-07 23:52:36
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