应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR求指点
867/9返回列表首页上一页456789下一页
查看: 3896  |  回复: 85
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
56楼: Originally posted by 杨仔 at 2014-08-07 17:15:53
弱弱的说一句，你的引物在我们这都可以72℃两步法退火延伸了。你的结果也明显反映出了退火温度低、特异性差的问题了。

两步延伸，这个怎么做？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
岁月静好
61楼2014-08-08 23:12:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
52楼: Originally posted by zhifangli at 2014-08-06 08:24:10
引物貌似不太合适，特异性不高，建议重新设计，Primer-BLAST很好用

是引物设计软件还是NCBI上的那个？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
岁月静好
62楼2014-08-08 23:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
54楼: Originally posted by wszl666 at 2014-08-06 11:10:42
请问，是用什么模板扩增的？

质粒做的模板

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
岁月静好
63楼2014-08-08 23:14:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
55楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-07 15:26:13
建议加终浓度1%的DMSO，如果不想建议换酶P，Taq酶适合短片段的PCR，你可以试试LA Taq或者其他酶。

我试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
岁月静好
64楼2014-08-08 23:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:22
首先lz的图片我不敢恭维，估计是拍照光圈没调好；接着lz的目的条带是1600，看mark跑的很好，应该是2000bp的，可我在图上完全看不到目的条带，也不知道是图的问题还是本来就没p出来；然后还是图的问题，我基本上看不出有无拖尾等现象，如果说1600处隐约有带，只是不亮，那还好，证明p出来了，如果出现拖尾，带跑的不好，那可以提高引物特异性，或是优化退火温度和体系，一般选推荐tm之中较高的。祝lz实验顺利！
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
65楼2014-08-09 09:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

基因组dna条带好浓

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
66楼2014-08-09 09:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silence1
67楼2014-08-09 09:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15994135778

金虫 (正式写手)
非特异性扩增，先不带酶切位点设计引物，扩增试试，如果能扩增到，再用产物做模板，用带酶切位点的引物做实验。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
68楼2014-08-09 10:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:41
条带不清晰，且杂带多，目的条带不单一，也许你这个就是这样，但是需要回收的一定得清晰。建议提高退火温度试试，提高3-5度，循环也可适当增加，最好不要超过40个。纯做交流，如果有错误可以指出

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
69楼2014-08-09 10:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

2）变性        94℃       45 s
            3）退火        52℃       1 min
            4）延伸        72℃       90 s
      1600bp 你试试这样
赞一下 回复此楼
70楼2014-08-09 10:42:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Phoebe.Lee 的主题更新
867/9返回列表首页上一页456789下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭