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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

引用回帖:
56楼: Originally posted by 杨仔 at 2014-08-07 17:15:53
弱弱的说一句,你的引物在我们这都可以72℃两步法退火延伸了。你的结果也明显反映出了退火温度低、特异性差的问题了。

两步延伸,这个怎么做?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
岁月静好
61楼2014-08-08 23:12:14
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

引用回帖:
52楼: Originally posted by zhifangli at 2014-08-06 08:24:10
引物貌似不太合适,特异性不高,建议重新设计,Primer-BLAST很好用

是引物设计软件还是NCBI上的那个?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
岁月静好
62楼2014-08-08 23:13:49
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

引用回帖:
54楼: Originally posted by wszl666 at 2014-08-06 11:10:42
请问,是用什么模板扩增的?

质粒做的模板

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
岁月静好
63楼2014-08-08 23:14:34
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

引用回帖:
55楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-07 15:26:13
建议加终浓度1%的DMSO,如果不想建议换酶P,Taq酶适合短片段的PCR,你可以试试LA Taq或者其他酶。

我试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
岁月静好
64楼2014-08-08 23:16:09
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:22
首先lz的图片我不敢恭维,估计是拍照光圈没调好;接着lz的目的条带是1600,看mark跑的很好,应该是2000bp的,可我在图上完全看不到目的条带,也不知道是图的问题还是本来就没p出来;然后还是图的问题,我基本上看不出有无拖尾等现象,如果说1600处隐约有带,只是不亮,那还好,证明p出来了,如果出现拖尾,带跑的不好,那可以提高引物特异性,或是优化退火温度和体系,一般选推荐tm之中较高的。祝lz实验顺利!
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
65楼2014-08-09 09:13:03
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

基因组dna条带好浓

[ 发自小木虫客户端 ]
66楼2014-08-09 09:45:04
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67楼2014-08-09 09:46:34
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15994135778

金虫 (正式写手)

非特异性扩增,先不带酶切位点设计引物,扩增试试,如果能扩增到,再用产物做模板,用带酶切位点的引物做实验。

[ 发自小木虫客户端 ]
68楼2014-08-09 10:22:04
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:41
条带不清晰,且杂带多,目的条带不单一,也许你这个就是这样,但是需要回收的一定得清晰。建议提高退火温度试试,提高3-5度,循环也可适当增加,最好不要超过40个。纯做交流,如果有错误可以指出

[ 发自小木虫客户端 ]
69楼2014-08-09 10:32:18
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

2)变性        94℃       45 s
            3)退火        52℃       1 min
            4)延伸        72℃       90 s
      1600bp 你试试这样
70楼2014-08-09 10:42:06
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