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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

应助: 1 (幼儿园)
金币: 622.8
散金: 97
帖子: 152
在线: 66小时
虫号: 1767711
注册: 2012-04-20
性别: MM
专业: 细胞增殖、生长与分化

[求助] PCR求指点已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG
下游引物：CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC
加了酶切位点和保护碱基
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8（Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件：35个循环  Takara  Taq酶目的片段1600左右
               94    5min
               94       30s
               56-64 30s
               72       2min
               72       10min
PCR跑胶结果如图，求大神指点

jiaotu.jpg

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岁月静好

1楼 2014-08-04 17:03:01

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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

应助: 42 (小学生)
金币: 12421.4
散金: 194
红花: 11
帖子: 1813
在线: 443.6小时
虫号: 1608309
注册: 2012-02-09
性别: GG
专业: 林木遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:22

首先lz的图片我不敢恭维，估计是拍照光圈没调好；接着lz的目的条带是1600，看mark跑的很好，应该是2000bp的，可我在图上完全看不到目的条带，也不知道是图的问题还是本来就没p出来；然后还是图的问题，我基本上看不出有无拖尾等现象，如果说1600处隐约有带，只是不亮，那还好，证明p出来了，如果出现拖尾，带跑的不好，那可以提高引物特异性，或是优化退火温度和体系，一般选推荐tm之中较高的。祝lz实验顺利！