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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Phoebe.Lee

版主

。。。

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物：CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8（Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件：35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图，求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
1楼 2014-08-04 17:03:01
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867575969

主管区长

One Piece

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:35:22
首先lz的图片我不敢恭维，估计是拍照光圈没调好；接着lz的目的条带是1600，看mark跑的很好，应该是2000bp的，可我在图上完全看不到目的条带，也不知道是图的问题还是本来就没p出来；然后还是图的问题，我基本上看不出有无拖尾等现象，如果说1600处隐约有带，只是不亮，那还好，证明p出来了，如果出现拖尾，带跑的不好，那可以提高引物特异性，或是优化退火温度和体系，一般选推荐tm之中较高的。祝lz实验顺利！
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
65楼2014-08-09 09:13:03
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pzx1004

管理员
★
Phoebe.Lee(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 17:07:02
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chyzm

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-08-04 19:41:04
我不太懂，不是说回复就有金币么？
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-04 17:44:25
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aabuzhangjun

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
祝福，祈福，愿楼主今后一切顺利，愿自己及女朋友工作顺利，祈福！
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-04 17:54:54
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