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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
18楼: Originally posted by alicelchf at 2014-08-04 23:40:06
请写清楚你用的浓度

Takara taq （5 units/ul）       0.125ul
10x pcr buffer (Mg2+ free)     2.5 ul
25 mM Mg2Cl2                       1.5 ul
dNTP mixture (各2.5 mM）      2ul
DNA 51ng/ul                         2ul
引物F （10 mM)                      1ul
引物R  （10mM)                      1ul
ddH2O                                up to 25 ul
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岁月静好
41楼2014-08-05 15:22:51
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
38楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2014-08-05 15:07:11
Takara 2000的marker 用有目的基因的质粒做模板...

囧…marker最亮750?你这…那几乎就没有带啊，再说还是拿质粒做的模板，按理很好扩的说，你引物是primer5设计的？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
42楼2014-08-05 15:32:24
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
42楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-08-05 15:32:24
囧…marker最亮750?你这…那几乎就没有带啊，再说还是拿质粒做的模板，按理很好扩的说，你引物是primer5设计的？
...

引物是SnapGene
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岁月静好
43楼2014-08-05 15:48:02
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hululu0725

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:21:34
退火温度分别设55,60,65三个点试试吧，循环数P多点吧，40个循环试试吧，仅供参考。。。
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44楼2014-08-05 15:58:05
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xm-jf

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
MARK是2000的？提高退火温度试试，还是因为引物的特异性不强？
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45楼2014-08-05 16:08:06
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yc-英超

木虫 (著名写手)

火帅

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ZHEGEZHEBDE  M,AD KKZ;CKZZ;CZ
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46楼2014-08-05 16:19:11
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alicelchf

木虫 (著名写手)
引用回帖:
41楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2014-08-05 15:22:51
Takara taq （5 units/ul）       0.125ul
10x pcr buffer (Mg2+ free)     2.5 ul
25 mM Mg2Cl2                       1.5 ul
dNTP mixture (各2.5 mM）      2ul
DNA 51ng/ul                         2u ...

怎么感觉都是u Mol 啊
正常的话 你的体系没有问题，模板试剂盒提出来的就加0.8-1ul的样子，模板10um加1ul
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修身、齐家、治国、平天下
47楼2014-08-05 16:26:00
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北化方华

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:21:20
感觉引物的特异性不是很好，可以加长引物，还有就是可以做touch down PCR，1600bp处的条带可以切胶回收做下一步的实验啊。
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48楼2014-08-05 18:04:39
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release53
49楼2014-08-05 18:24:39
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
48楼: Originally posted by 北化方华 at 2014-08-05 18:04:39
感觉引物的特异性不是很好，可以加长引物，还有就是可以做touch down PCR，1600bp处的条带可以切胶回收做下一步的实验啊。

去除酶切位点后有22个碱基了，还用再加长么
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岁月静好
50楼2014-08-05 18:31:41
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