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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Phoebe.Lee

专家顾问

。。。

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
18楼: Originally posted by alicelchf at 2014-08-04 23:40:06
请写清楚你用的浓度

Takara taq (5 units/ul)       0.125ul
10x pcr buffer (Mg2+ free)     2.5 ul
25 mM Mg2Cl2                       1.5 ul
dNTP mixture (各2.5 mM)      2ul
DNA 51ng/ul                         2ul
引物F (10 mM)                      1ul
引物R  (10mM)                      1ul
ddH2O                                up to 25 ul
岁月静好
41楼2014-08-05 15:22:51
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随风飘摇11

专家顾问

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【答案】应助回帖

引用回帖:
38楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2014-08-05 15:07:11
Takara 2000的marker 用有目的基因的质粒做模板...

囧…marker最亮750?你这…那几乎就没有带啊,再说还是拿质粒做的模板,按理很好扩的说,你引物是primer5设计的?

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
42楼2014-08-05 15:32:24
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Phoebe.Lee

超级版主

。。。

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
42楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-08-05 15:32:24
囧…marker最亮750?你这…那几乎就没有带啊,再说还是拿质粒做的模板,按理很好扩的说,你引物是primer5设计的?
...

引物是SnapGene
岁月静好
43楼2014-08-05 15:48:02
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hululu0725

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:21:34
退火温度分别设55,60,65三个点试试吧,循环数P多点吧,40个循环试试吧,仅供参考。。。
44楼2014-08-05 15:58:05
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xm-jf

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
MARK是2000的?提高退火温度试试,还是因为引物的特异性不强?
45楼2014-08-05 16:08:06
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yc-英超

主管区长

火帅

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ZHEGEZHEBDE  M,AD KKZ;CKZZ;CZ
46楼2014-08-05 16:19:11
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alicelchf

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
41楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2014-08-05 15:22:51
Takara taq (5 units/ul)       0.125ul
10x pcr buffer (Mg2+ free)     2.5 ul
25 mM Mg2Cl2                       1.5 ul
dNTP mixture (各2.5 mM)      2ul
DNA 51ng/ul                         2u ...

怎么感觉都是u Mol 啊
正常的话 你的体系没有问题,模板试剂盒提出来的就加0.8-1ul的样子,模板10um加1ul
修身、齐家、治国、平天下
47楼2014-08-05 16:26:00
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北化方华

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:21:20
感觉引物的特异性不是很好,可以加长引物,还有就是可以做touch down PCR,1600bp处的条带可以切胶回收做下一步的实验啊。
48楼2014-08-05 18:04:39
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release53

专家顾问

49楼2014-08-05 18:24:39
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Phoebe.Lee

主管区长

。。。

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
48楼: Originally posted by 北化方华 at 2014-08-05 18:04:39
感觉引物的特异性不是很好,可以加长引物,还有就是可以做touch down PCR,1600bp处的条带可以切胶回收做下一步的实验啊。

去除酶切位点后有22个碱基了,还用再加长么
岁月静好
50楼2014-08-05 18:31:41
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