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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR求指点
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物：CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8（Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件：35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图，求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
1楼 2014-08-04 17:03:01
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
18楼: Originally posted by alicelchf at 2014-08-04 23:40:06
请写清楚你用的浓度

Takara taq （5 units/ul）       0.125ul
10x pcr buffer (Mg2+ free)     2.5 ul
25 mM Mg2Cl2                       1.5 ul
dNTP mixture (各2.5 mM）      2ul
DNA 51ng/ul                         2ul
引物F （10 mM)                      1ul
引物R  （10mM)                      1ul
ddH2O                                up to 25 ul
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岁月静好
41楼2014-08-05 15:22:51
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pzx1004
★
Phoebe.Lee(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 17:07:02
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chyzm

铁杆木虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-08-04 19:41:04
我不太懂，不是说回复就有金币么？
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5楼2014-08-04 17:44:25
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aabuzhangjun

新虫 (知名作家)
祝福，祈福，愿楼主今后一切顺利，愿自己及女朋友工作顺利，祈福！
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-04 17:54:54
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