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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

你的引物光是特异性区域的Tm就在70℃左右，提高退火温度。
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81楼2014-08-11 16:06:03
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placopolymer
82楼2014-08-11 16:44:35
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匿名

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83楼2014-08-12 03:07:45
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
83楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-08-12 03:07:45
根据你引物的tm值，退火温度设定60度理论上应该可以p出，不用设梯度。你是什么marker？要扩增多大的片断呢？应该2000以内的。

2000的marker 扩1600的片段
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岁月静好
84楼2014-08-12 12:15:32
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匿名

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85楼2014-08-12 13:38:19
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
85楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-08-12 13:38:19
你的重组质粒鉴定过没有？做菌落pcr了吗？要确保目的片段已经连入了载体。还有就是质粒的浓度多少？一般以质粒为模板很好p的 。

我是用从别人cDNA文库要的目的基因的质粒，浓度20ng/ul
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岁月静好
86楼2014-08-12 14:04:14
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