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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Phoebe.Lee

实习版主

。。。

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物：CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8（Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件：35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图，求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
1楼 2014-08-04 17:03:01
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杨仔

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

弱弱的说一句，你的引物在我们这都可以72℃两步法退火延伸了。你的结果也明显反映出了退火温度低、特异性差的问题了。
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56楼2014-08-07 17:15:53
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pzx1004

版主
★
Phoebe.Lee(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 17:07:02
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chyzm

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-08-04 19:41:04
我不太懂，不是说回复就有金币么？
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-04 17:44:25
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aabuzhangjun

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
祝福，祈福，愿楼主今后一切顺利，愿自己及女朋友工作顺利，祈福！
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-04 17:54:54
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