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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 明胶与壳聚糖如何固定化酶
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

[求助] 明胶与壳聚糖如何固定化酶 已有1人参与

大家好  最近做明胶与壳聚糖复合做成凝胶    采用包埋交联发做成固定化酶小球   请问大家怎么做的  求指教  急急急   必有重谢
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求解答
1楼 2014-07-28 16:15:44
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

likedong1021: 好热心的虫友，鼓励在帖子里讨论！ 2014-08-04 14:59:22
要看你需要多大的固定化酶小球了，是纳米级的？微米级的？还是毫米级的？各有各的方法。
而且还要看你需要固定化的酶是什么特点？怕不怕温变？极端pH下会不会变性？如果会，是怕酸还是怕碱？可以发站内信，咱们一起讨论
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2楼2014-08-04 13:52:06
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

那就在帖子里讨论吧
总体思路都是预先把载体材料（明胶或壳聚糖）的溶液与酶溶液混合，然后再交联形成凝胶。
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3楼2014-08-05 09:02:36
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
likedong1021: BM-EPI+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！回答的相当详细准确！ 2014-08-05 16:02:48
赖穗0911(likedong1021代发): 金币+5, 感谢回帖交流！ 2014-10-12 16:18:01
毫米级的固定化酶载体最好制备，用注射法就行。这种方法适用于明胶更多一些。把明胶热溶液抽到一次性注射器中，然后滴加到含有交联剂（也可不加）的冷水中，就得到了凝胶球，大概1毫米多吧。相关工作可以关注一下法国livage/Coradin课题组，天大zhongyi Jiang课题组也在去年发了一篇，第一作者Xiaokai Song。
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4楼2014-08-05 09:33:00
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

微米级的载体嘛，乳化法就差不多，把高分子/酶混合溶液加入到油相中，放一些表面活性剂，搅拌分散，然后交联成型就可以了。
纳米级的方法也不少，明胶包埋的可以用二次复凝聚法，壳聚糖包埋的可以直接用酸沉淀法
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5楼2014-08-05 09:40:38
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

当然，固定化酶的最大特点是量体裁衣，必须要看你固定的是什么样的酶。
明胶具有热可逆性，所以加热-冷却是最常用的制备凝胶手段，但是你的酶如果在40℃以上失活，这个方法就不能用了。
壳聚糖和明胶都有胺基，所以可以用戊二醛交联，但是你的酶如果活性位点有较多胺基，这个方法就有可能失活。
壳聚糖在酸性溶液中可以溶解，经调整ph值能直接沉淀成型，但是你的酶如果对pH敏感，这个方法不能用。
还是要楼主综合考虑的
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6楼2014-08-05 09:45:19
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pandawenzi at 2014-08-05 09:45:19
当然，固定化酶的最大特点是量体裁衣，必须要看你固定的是什么样的酶。
明胶具有热可逆性，所以加热-冷却是最常用的制备凝胶手段，但是你的酶如果在40℃以上失活，这个方法就不能用了。
壳聚糖和明胶都有胺基，所 ...

十分感谢您能这么有耐心的给我回复  非常有用的信息

首先，我做的事毫米级别的小球，直径大概在3-5mm左右，所以这就需要我的混合凝胶具有一定的粘度，用一次性胶管滴加到凝聚液中
第二，我查了一下壳聚糖的凝聚液是具有碱性的溶液，好多文献采用3%氢氧化钠，而这个碱度在13左右，超出了我的酶的耐受范围所以选择合适的凝聚液是个问题
第三，我做木瓜蛋白酶，不知道这个性位点的胺基多不多，还有一个问题明胶属于蛋白质，会水解掉我的明胶变得稀稠，文献也有用酶法水解明胶


您能和我详细的聊聊吗  万分感谢
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求解答
7楼2014-08-20 10:10:26
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 赖穗0911 at 2014-08-20 10:10:26
十分感谢您能这么有耐心的给我回复  非常有用的信息

首先，我做的事毫米级别的小球，直径大概在3-5mm左右，所以这就需要我的混合凝胶具有一定的粘度，用一次性胶管滴加到凝聚液中
第二，我查了一下 ...

我还需要了解一下你固定化酶的具体目的
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8楼2014-08-21 21:33:48
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