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赖穗0911

新虫 (小有名气)

[求助] 明胶与壳聚糖如何固定化酶 已有1人参与

大家好  最近做明胶与壳聚糖复合做成凝胶    采用包埋交联发做成固定化酶小球   请问大家怎么做的  求指教  急急急   必有重谢
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
likedong1021: BM-EPI+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流!回答的相当详细准确! 2014-08-05 16:02:48
赖穗0911(likedong1021代发): 金币+5, 感谢回帖交流! 2014-10-12 16:18:01
毫米级的固定化酶载体最好制备,用注射法就行。这种方法适用于明胶更多一些。把明胶热溶液抽到一次性注射器中,然后滴加到含有交联剂(也可不加)的冷水中,就得到了凝胶球,大概1毫米多吧。相关工作可以关注一下法国livage/Coradin课题组,天大zhongyi Jiang课题组也在去年发了一篇,第一作者Xiaokai Song。
4楼2014-08-05 09:33:00
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普通回帖

pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

likedong1021: 好热心的虫友,鼓励在帖子里讨论! 2014-08-04 14:59:22
要看你需要多大的固定化酶小球了,是纳米级的?微米级的?还是毫米级的?各有各的方法。
而且还要看你需要固定化的酶是什么特点?怕不怕温变?极端pH下会不会变性?如果会,是怕酸还是怕碱?可以发站内信,咱们一起讨论
2楼2014-08-04 13:52:06
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

那就在帖子里讨论吧
总体思路都是预先把载体材料(明胶或壳聚糖)的溶液与酶溶液混合,然后再交联形成凝胶。
3楼2014-08-05 09:02:36
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

微米级的载体嘛,乳化法就差不多,把高分子/酶混合溶液加入到油相中,放一些表面活性剂,搅拌分散,然后交联成型就可以了。
纳米级的方法也不少,明胶包埋的可以用二次复凝聚法,壳聚糖包埋的可以直接用酸沉淀法
5楼2014-08-05 09:40:38
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

当然,固定化酶的最大特点是量体裁衣,必须要看你固定的是什么样的酶。
明胶具有热可逆性,所以加热-冷却是最常用的制备凝胶手段,但是你的酶如果在40℃以上失活,这个方法就不能用了。
壳聚糖和明胶都有胺基,所以可以用戊二醛交联,但是你的酶如果活性位点有较多胺基,这个方法就有可能失活。
壳聚糖在酸性溶液中可以溶解,经调整ph值能直接沉淀成型,但是你的酶如果对pH敏感,这个方法不能用。
还是要楼主综合考虑的
6楼2014-08-05 09:45:19
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by pandawenzi at 2014-08-05 09:45:19
当然,固定化酶的最大特点是量体裁衣,必须要看你固定的是什么样的酶。
明胶具有热可逆性,所以加热-冷却是最常用的制备凝胶手段,但是你的酶如果在40℃以上失活,这个方法就不能用了。
壳聚糖和明胶都有胺基,所 ...

十分感谢您能这么有耐心的给我回复  非常有用的信息

首先,我做的事毫米级别的小球,直径大概在3-5mm左右,所以这就需要我的混合凝胶具有一定的粘度,用一次性胶管滴加到凝聚液中
第二,我查了一下壳聚糖的凝聚液是具有碱性的溶液,好多文献采用3%氢氧化钠,而这个碱度在13左右,超出了我的酶的耐受范围所以选择合适的凝聚液是个问题
第三,我做木瓜蛋白酶,不知道这个性位点的胺基多不多,还有一个问题明胶属于蛋白质,会水解掉我的明胶变得稀稠,文献也有用酶法水解明胶


您能和我详细的聊聊吗  万分感谢
求解答
7楼2014-08-20 10:10:26
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pandawenzi

木虫 (著名写手)

小木虫动物园第一国宝

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 赖穗0911 at 2014-08-20 10:10:26
十分感谢您能这么有耐心的给我回复  非常有用的信息

首先,我做的事毫米级别的小球,直径大概在3-5mm左右,所以这就需要我的混合凝胶具有一定的粘度,用一次性胶管滴加到凝聚液中
第二,我查了一下 ...

我还需要了解一下你固定化酶的具体目的
8楼2014-08-21 21:33:48
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