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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶
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dl19871205

银虫 (小有名气)

[求助] 壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶

最近做壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶，具体方法如下：
•壳聚糖微球的制备
0.3 g壳聚糖用20 mL 2%的乙酸溶液溶解，超声至气泡消失变成透明凝胶。用1 mL移液枪移取5 mL上述凝胶至25 mL凝结液中。凝结液组成为15%NaOH溶液/95%乙醇(v/v)=4︰1。4℃下硬化12 h后用去离子水洗微球至中性，4℃保存。
•壳聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶(先交联后固定)
准确称取一定质量壳聚糖微球于5 mL 浓度1%、pH 6.5的戊二醛溶液中，30℃下振荡(150rpm)交联2h。洗去多余的戊二醛。向活化的壳聚糖小球中加入0.1 mLβ-半乳糖苷酶，用pH 6.5的磷酸盐缓冲液稀释至5 mL，30℃振荡12h后，洗去小球表面的游离β-半乳糖苷酶即制得固定化β-半乳糖苷酶。
测定上清液剩余酶活基本没有，用测定游离酶活的方法测定固定化β-半乳糖苷酶的酶活也很小，计算下来酶活回收率都不到1%。问题：如果上清液基本没有酶活，理论上固定化酶酶活应该相对较高，但是现在却很低。即使戊二醛会使部分固定化酶失活也不至于这么低吧？
请高手指点！不胜感激！
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永不言弃！
1楼 2012-03-27 14:49:00
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hezi001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LZ应该仔细回顾一下实验过程中是否带入了哪些影响酶活性的物质？
我做过活性炭固载化的，酶活性也有大量失活。
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2楼2012-04-07 09:42:18
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
请问 问题出在哪里了呢  我的也是这样  没有任何酶活？？？急急急急
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求解答
3楼2014-06-23 12:54:55
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
请问你用什么方法测定酶活
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4楼2014-06-23 13:01:22
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
戊二醛残留会降低酶活
还有半乳糖酶的最适合酸碱度是多少啊 15%的氢氧化钠做成的小球 你除掉了强碱的影响吗
我也做这方面  可以好好交流一下吗   我做包埋  再交联  所以  好多也不太懂  咱两的酶也不一样
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求解答
5楼2014-08-20 10:53:22
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奋斗的小生

新虫 (正式写手)
制备壳聚糖微球时用什么代替三聚磷酸钠？

发自小木虫Android客户端
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6楼2016-09-06 19:02:13
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