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dl19871205银虫 (小有名气)
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壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶
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最近做壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶，具体方法如下： •壳聚糖微球的制备 0.3 g壳聚糖用20 mL 2%的乙酸溶液溶解，超声至气泡消失变成透明凝胶。用1 mL移液枪移取5 mL上述凝胶至25 mL凝结液中。凝结液组成为15%NaOH溶液/95%乙醇(v/v)=4︰1。4℃下硬化12 h后用去离子水洗微球至中性，4℃保存。 •壳聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶(先交联后固定) 准确称取一定质量壳聚糖微球于5 mL 浓度1%、pH 6.5的戊二醛溶液中，30℃下振荡(150rpm)交联2h。洗去多余的戊二醛。向活化的壳聚糖小球中加入0.1 mLβ-半乳糖苷酶，用pH 6.5的磷酸盐缓冲液稀释至5 mL，30℃振荡12h后，洗去小球表面的游离β-半乳糖苷酶即制得固定化β-半乳糖苷酶。 测定上清液剩余酶活基本没有，用测定游离酶活的方法测定固定化β-半乳糖苷酶的酶活也很小，计算下来酶活回收率都不到1%。问题：如果上清液基本没有酶活，理论上固定化酶酶活应该相对较高，但是现在却很低。即使戊二醛会使部分固定化酶失活也不至于这么低吧？ 请高手指点！不胜感激！ |
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