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dl19871205

银虫 (小有名气)

[求助] 壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶

最近做壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶,具体方法如下:
•壳聚糖微球的制备
0.3 g壳聚糖用20 mL 2%的乙酸溶液溶解,超声至气泡消失变成透明凝胶。用1 mL移液枪移取5 mL上述凝胶至25 mL凝结液中。凝结液组成为15%NaOH溶液/95%乙醇(v/v)=4︰1。4℃下硬化12 h后用去离子水洗微球至中性,4℃保存。
•壳聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶(先交联后固定)
准确称取一定质量壳聚糖微球于5 mL 浓度1%、pH 6.5的戊二醛溶液中,30℃下振荡(150rpm)交联2h。洗去多余的戊二醛。向活化的壳聚糖小球中加入0.1 mLβ-半乳糖苷酶,用pH 6.5的磷酸盐缓冲液稀释至5 mL,30℃振荡12h后,洗去小球表面的游离β-半乳糖苷酶即制得固定化β-半乳糖苷酶。
测定上清液剩余酶活基本没有,用测定游离酶活的方法测定固定化β-半乳糖苷酶的酶活也很小,计算下来酶活回收率都不到1%。问题:如果上清液基本没有酶活,理论上固定化酶酶活应该相对较高,但是现在却很低。即使戊二醛会使部分固定化酶失活也不至于这么低吧?
请高手指点!不胜感激!
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永不言弃!
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奋斗的小生

新虫 (正式写手)

制备壳聚糖微球时用什么代替三聚磷酸钠?

发自小木虫Android客户端
6楼2016-09-06 19:02:13
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hezi001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
LZ应该仔细回顾一下实验过程中是否带入了哪些影响酶活性的物质?
我做过活性炭固载化的,酶活性也有大量失活。
2楼2012-04-07 09:42:18
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

请问 问题出在哪里了呢  我的也是这样  没有任何酶活???急急急急
求解答
3楼2014-06-23 12:54:55
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

请问你用什么方法测定酶活
求解答
4楼2014-06-23 13:01:22
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