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linzshit

银虫 (小有名气)

[求助] 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比 已有3人参与

现在遇到一个技术难点,举个例子就是我混合两种不同的质粒A和B,质粒之间只存在一个点的差别,我用定量的方式确定两种质粒的浓度,然后进行混合,混合方式为A/(A+B)=5%,这里的百分比是浓度比。现在问题来了,对于混合后的样本,我想鉴定它到底是不是按我预想的混合成5%了,有什么方法吗?希望大神能够解答,谢谢
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2 2014-07-29 19:10:18
引用回帖:
7楼: Originally posted by linzshit at 2014-07-29 11:34:11
这就是我当初的设想,酶切后混合样本,然后红色和绿色引物组能分别检测其中的一种,由于两种质粒都被酶切成线性的,所以互相之间没有干扰,即使是混合以后,之后就可以按照Ct值大概的换算一下,但是实际情况是,即 ...

不是只有一个点突变吗?怎么画成这个图的?而且即使你要用到QPCR,两对引物是不能直接进行比较的,扩增效率和产物长度不同,真要进行比较,理论上要用绝对定量,或者双标准曲线法
8楼2014-07-29 12:25:36
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:10
大神的不是 可以做soutern blot
2楼2014-07-28 14:33:14
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:18
southern探针都比较长,单个碱基突变似乎不好做
可以试试看QPCR的方法,把突变点设置为3'最后一个碱基
A引物扩增B的 B引物扩增A的 看看能否达到区分效果(看ct值差别大不大。。)
如果质粒量比较足的话,还可以试试酶切。。
不是大神的路过
3楼2014-07-28 18:34:46
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linzshit

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-28 14:33:14
大神的不是 可以做soutern blot

southern的话是如何做到定量的啊,我需要精确定量到5%,这个能实现吗?
4楼2014-07-29 09:16:46
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