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求知者001

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[求助] 标准溶液的高效液相色谱图,两个峰区分不开怎么办? 已有2人参与

7月24日下午做标准溶液(纯标样配制,混标,7种成分)高效液相出图,紫外检测器,如2014.7.24,各种物质是分开的,出峰较好,但这是第一次测试,就碰巧出现这种情况,老师也很惊讶。后来停电,中断,样品放在仪器中取不出来。
标准溶液的高效液相色谱图,两个峰区分不开怎么办?
2014.7.24下午.JPG
7月25日再做,出图跟24日差别很大,出峰时间全部提前,且有总是有两种组分分不开。后来重新取过标液后再测试,情况仍无改观。具体图见2014.7.25。
标准溶液的高效液相色谱图,两个峰区分不开怎么办?-1
2014.7.25-25.JPG
标准溶液的高效液相色谱图,两个峰区分不开怎么办?-2
2014.7.25-20.JPG
后来调整流动相,2014.7.25对比图(从上至下)分别为如下梯度洗脱:
上:乙腈         0.01M草酸                       中:                                                   下:
0     10%           90%                               0     10%        90%                           0     10%        90%
17   30%           70%                              17     20%       80%                           17     25%       75%
20   40%           60%                              20   40%         60%                           20   40%         60%
梯度洗脱变化的只是第17min是乙腈的比例。从图上看出,乙腈为25%、30%时第4、5个峰分不开,而25%似乎比30%要好那么一点点;20%时第1、2峰和第4、5峰都分不开。当乙腈<15%时,只有六个峰。
标准溶液的高效液相色谱图,两个峰区分不开怎么办?-3
2014.7.25-对比.JPG
请问各位有经验的大侠,我该如何改进?急!
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人生最曼妙的风景,是内心的淡定与从容。
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鸦鸦

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
求知者001: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 非常感谢~ 2014-08-03 20:43:10
xuweimbf: 金币+1, 积极交流 2014-08-07 08:06:44
首先,用固定流动相冲洗柱子,以排除因停电等原因造成柱子和管路的污染;
第二,也是最重要的,你流动相比例的切换时间不对,分不开的几种组分主要集中在10min之前, 甚至8 min之前,所以你17min切换意义不大,建议早些切换,比如5 min左右,可以试试看
6楼2014-07-29 16:52:32
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晓春儿

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
改变比例,试试能否

[ 发自小木虫客户端 ]
阳光静好,我待如花
2楼2014-07-26 07:45:53
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求知者001

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 晓春儿 at 2014-07-26 07:45:53
改变比例,试试能否

我试了很多比例,效果都不行,不知道你有没有具体的比例建议。。
人生最曼妙的风景,是内心的淡定与从容。
3楼2014-07-26 07:50:29
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求知者001

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求知者001: 回帖置顶 2014-07-26 07:53:06
从对比图中似乎可以得出这样的结论,第1、2峰分开要乙腈比例大一些,而第4、5峰分开又要乙腈浓度小一些。但是出峰是是1、2先出,4、5后出。这怎么办啊?
人生最曼妙的风景,是内心的淡定与从容。
4楼2014-07-26 07:52:56
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