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protein780

铁虫 (小有名气)

[求助] 内毒素干扰实验,有些不理解,求组各路朋友帮忙解惑。 已有2人参与

1.药典上说用未检查出内毒素的供试品稀释标准品,我的样品从未做过检测,怎么可能知道是否含有内毒素呢?
2.我跳过干扰实验直接做凝胶限量实验,发现样品在最大稀释范围与鲎试剂反应时仍未阳性,这个怎么排除是否是因为有干扰增强的因素呢?
3.抗体类药物在生产时内毒素最大限值是多少呢?有的说10EU/剂量,是这样的吗?
4.干扰实验的原理是什么呢?“通过比较鲎试剂与内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度,来确定供试品在该浓度下是否对BET检查有干扰”,这一说法,我不太明白,供试品里面肯定会有一部分内毒素的呀,再加入标准品,肯定会增加呈现阳性的概率。
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protein780

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 农场小猪 at 2014-07-28 09:43:31
你用的是多少灵敏度的在做,是的 都是阳性,可能是要增加倍数了 换高灵敏度的。问题还是那些。
首先鲎试剂必须在有2价的Mg Ca存在下参与激活才能发生凝固,你都是阳性,看来你样品不会是碱性大于10的,不会出现假 ...

我现在用的是0.25EUl的鲎试剂,样品pH7左右,样品是抗体类药物,不是道是否会与鲎试剂螯合,也许纯化过程中不够严格,下次实验的样品我打算过滤除菌再试试,接下来想选用0.03EU的鲎试剂,0.03就必须做热源了吗?请问,有相关的规定吗?
9楼2014-07-28 11:05:26
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protein780

铁虫 (小有名气)

有没有了解的朋友给个帮助呢?
2楼2014-07-25 12:28:16
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绿茶清羽

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
protein780: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-25 17:12:05
1、个人认为,这个“未检查出内毒素的供试品稀释标准品”指的是:在做干扰实验之前,肯定会做相应干扰预实验来确定供试品的合适浓度,而在此浓度下的供试品,用你确定的鲎试剂实验之后是不会有阳性反应的。也就是,此浓度的供试品,内毒素含量应是在你定的限值以内的;
2、你做供试品阳性反应了吗?如果做了,阳性反应不是阳性的话,才能证明你的供试品对结果是有干扰的。你可以检测一下PH值,看是否在合适的PH值范围内,像枸橼酸、组氨酸等等的PH干扰都很大;
3、内毒素限值是根据药典上的公式算出来的,如果觉得药典上的限值过大,可参考同类产品的内毒素限值,个人认为,严格一些是好事。并不是所有的抗体类药物的内毒素限值都是10EU/剂量;
4、这个就是一个回收实验。检查一下你选择的供试品浓度是否对鲎试剂反应无干扰。一般
加油!!!!!!!!!!!!
3楼2014-07-25 14:28:04
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protein780

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 绿茶清羽 at 2014-07-25 14:28:04
1、个人认为,这个“未检查出内毒素的供试品稀释标准品”指的是:在做干扰实验之前,肯定会做相应干扰预实验来确定供试品的合适浓度,而在此浓度下的供试品,用你确定的鲎试剂实验之后是不会有阳性反应的。也就是, ...

谢谢,非常感谢,另外,你有抗体类药物内毒素限值的数据吗?我查不到呢,能否给我说一些,不用多,我参考下,hdsdau@163.com
4楼2014-07-25 17:02:30
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