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W格子

新虫 (初入文坛)

[求助] RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事? 已有9人参与

我的细胞染菌了,重新复苏了一管。结果培养了一天,只有稀稀落落的很少量的细胞贴壁了,这是细胞死了的意思吗?
我寻思可能那些未贴壁的也不会再贴壁了,就换了液(含10%FBS的DMEM培养基),继续培养了,希望贴壁的那点儿能长起来。现在已经继续培养了两天了,看着好像比第一天多了一点点,有些是一坨坨的,有些是单个零星的分布着,但是仍然非常少。各位前辈遇到过这情况吗?我这可能是什么原因导致的呢?细胞还有希望长起来?我尝试再换液含20%血清的培养基养一下行吗?
急求指导~~  非常感谢~~
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袁1231

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
W格子: 金币+3, 有帮助 2014-07-25 13:07:38
引用回帖:
6楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-24 23:08:08
嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁,就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了,分别都有1h吧,对细胞有影响了?之后是-80℃12h,然后转入液氮罐。
冻存 ...

我也不知道是不是这个过程,也可能是你复苏的过程,复苏的时候要快,冻的时候要慢。美国这边有一种盒子,里面装异丙醇,然后放-80度,就是匀速降温了。
8楼2014-07-25 06:29:06
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那个

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
W格子: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-23 22:43:02
慢慢等一下吧
只要没染菌,慢慢养着吧,就别老折腾它们了。
俺们中心提供各种分析测试,iso品质,有需要站内哈~~~~
2楼2014-07-23 12:44:09
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W格子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 那个 at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要没染菌,慢慢养着吧,就别老折腾它们了。

好的吧  谢谢你
就是很害怕它长不起来了
3楼2014-07-23 22:42:36
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
W格子: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-24 23:09:10
首先确定你的培养条件没有问题,培养基里改加的都加了,培养基和血清都是合格的牌子和批次
然后确定你拿来复苏的细胞没有问题
再看看你的培养条件,二氧化碳还有吗,培养箱的水槽还有水吗,培养箱温度控制对不对,等等
如果一切都没问题,那就慢慢养吧
不需要换20%的
4楼2014-07-24 00:25:42
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