| 查看: 3135 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
不依赖链接反应的克隆为什么不需要连接酶？ 已有2人参与
|
|||
| 我最近在学习Ligase Independent Cloning ，基本原理：T4 DNA聚合酶的3’—5’外切酶活性形成粘性末端，在退火反应中具有同 源序列的载体和插入基因会连接起来；带缺口和突出端的DNA复合物在细菌中能有效被修复。我的问题是，连接酶的作用是回复3，5-磷酸二酯键，如果LIC不需要连接酶，为什么传统方法中限制性内切酶产生的粘性末端就需要DNA连接酶呢？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有208人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 2014年度浙江省自然科学基金拟资助项目清单
已经有14人回复
- 9.0kb载体与2.4kb片段为什么用T4连接酶连接，没有得到阳性克隆？
已经有7人回复
- 直接PCR产物转化的克隆新方法，不需要限制酶和连接酶（正式出版pdf版）
已经有78人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 平末端连接做不出来克隆
已经有30人回复
- 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
已经有13人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- 【原创】刚才发现的一个做克隆时涂板的小窍门
已经有16人回复
6楼2014-07-22 11:12:15
2楼2014-07-14 10:48:03
忘记将来
木虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 2511.3
- 散金: 506
- 红花: 2
- 帖子: 473
- 在线: 232.9小时
- 虫号: 815220
- 注册: 2009-07-24
- 专业: 生物化学
4楼2014-07-16 16:47:01
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+8, 回答到点子上！ 2014-07-17 11:29:29
gyesang: MolEPI+1 2014-07-17 11:29:45
如果苏西堕落: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:11:13
如果苏西堕落: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:15:50
gyesang: 金币+8, 回答到点子上！ 2014-07-17 11:29:29
gyesang: MolEPI+1 2014-07-17 11:29:45
如果苏西堕落: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:11:13
如果苏西堕落: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:15:50
|
传统的连接反应依赖sticky end, 只有3-5个碱基， 而两条互补单链通过3-5个互补碱基形成的环状DNA是不稳定的，很容易分开，所以需要ligase把缺口补上。 而ligation independent method， 主动制造20-30个互补单链。两条互补单链通过20-30个互补碱基而形成的环状DNA就稳定多了，从而可以再导入细胞后在修复缺口。 |
5楼2014-07-17 08:04:09
