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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 不依赖链接反应的克隆为什么不需要连接酶？
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如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)

[求助] 不依赖链接反应的克隆为什么不需要连接酶？ 已有2人参与

我最近在学习Ligase Independent Cloning ，基本原理：T4 DNA聚合酶的3’—5’外切酶活性形成粘性末端，在退火反应中具有同 源序列的载体和插入基因会连接起来；带缺口和突出端的DNA复合物在细菌中能有效被修复。我的问题是，连接酶的作用是回复3，5-磷酸二酯键，如果LIC不需要连接酶，为什么传统方法中限制性内切酶产生的粘性末端就需要DNA连接酶呢？
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1楼 2014-07-10 17:03:47
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依然weixuan

铜虫 (小有名气)
转到到大肠中会修复的
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2楼2014-07-14 10:48:03
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如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)
内容已删除
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3楼2014-07-14 20:13:48
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忘记将来

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那个是切刻 可以修复啊
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4楼2014-07-16 16:47:01
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muji9908

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+8, 回答到点子上！ 2014-07-17 11:29:29
gyesang: MolEPI+1 2014-07-17 11:29:45
如果苏西堕落: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:11:13
如果苏西堕落: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:15:50
传统的连接反应依赖sticky end, 只有3-5个碱基， 而两条互补单链通过3-5个互补碱基形成的环状DNA是不稳定的，很容易分开，所以需要ligase把缺口补上。
而ligation independent method， 主动制造20-30个互补单链。两条互补单链通过20-30个互补碱基而形成的环状DNA就稳定多了，从而可以再导入细胞后在修复缺口。
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5楼2014-07-17 08:04:09
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如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by muji9908 at 2014-07-17 08:04:09
传统的连接反应依赖sticky end, 只有3-5个碱基， 而两条互补单链通过3-5个互补碱基形成的环状DNA是不稳定的，很容易分开，所以需要ligase把缺口补上。
而ligation independent method， 主动制造20-30个互补单链。 ...

非常感谢，是我犯蠢了，嘻嘻。
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6楼2014-07-22 11:12:15
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