应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 不依赖链接反应的克隆为什么不需要连接酶？
61/1返回列表
查看: 2973  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)

[求助] 不依赖链接反应的克隆为什么不需要连接酶？ 已有2人参与

我最近在学习Ligase Independent Cloning ，基本原理：T4 DNA聚合酶的3’—5’外切酶活性形成粘性末端，在退火反应中具有同 源序列的载体和插入基因会连接起来；带缺口和突出端的DNA复合物在细菌中能有效被修复。我的问题是，连接酶的作用是回复3，5-磷酸二酯键，如果LIC不需要连接酶，为什么传统方法中限制性内切酶产生的粘性末端就需要DNA连接酶呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-10 17:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

依然weixuan

铜虫 (小有名气)
转到到大肠中会修复的
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-14 10:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)
内容已删除
回复此楼
3楼2014-07-14 20:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那个是切刻 可以修复啊
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-16 16:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muji9908

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+8, 回答到点子上！ 2014-07-17 11:29:29
gyesang: MolEPI+1 2014-07-17 11:29:45
如果苏西堕落: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:11:13
如果苏西堕落: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-22 11:15:50
传统的连接反应依赖sticky end, 只有3-5个碱基， 而两条互补单链通过3-5个互补碱基形成的环状DNA是不稳定的，很容易分开，所以需要ligase把缺口补上。
而ligation independent method， 主动制造20-30个互补单链。两条互补单链通过20-30个互补碱基而形成的环状DNA就稳定多了，从而可以再导入细胞后在修复缺口。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2014-07-17 08:04:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如果苏西堕落

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by muji9908 at 2014-07-17 08:04:09
传统的连接反应依赖sticky end, 只有3-5个碱基， 而两条互补单链通过3-5个互补碱基形成的环状DNA是不稳定的，很容易分开，所以需要ligase把缺口补上。
而ligation independent method， 主动制造20-30个互补单链。 ...

非常感谢，是我犯蠢了，嘻嘻。
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-22 11:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 如果苏西堕落 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕，求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 7/350 2026-03-24 17:11 by hello七七
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 求材料，环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭