24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 7525  |  回复: 62

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zixiao_226 at 2014-07-09 08:45:38
可以浓缩下体积,最好是重新扩一次,会好点

如何浓缩体积 呢
11楼2014-07-10 08:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-08 16:38:50
乙醇沉淀。如果用柱子不能直接上吧,毕竟你的片段溶剂就是洗脱液。

乙醇沉淀?是我用回收好的直接加乙醇进行沉淀吗?能详细说一下吗
12楼2014-07-10 10:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zixiao_226 at 2014-07-09 08:45:38
可以浓缩下体积,最好是重新扩一次,会好点

如何浓缩体积?能具体说一下吗 ?谢谢
13楼2014-07-10 10:31:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-10 10:31:12
乙醇沉淀?是我用回收好的直接加乙醇进行沉淀吗?能详细说一下吗...

直接加乙醇沉淀
14楼2014-07-10 10:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 15:10:37
直接乙醇沉淀,跟你做质粒提取一样的节奏,乙醇沉淀重新融水,少融一点就OK了,不过我一般会直接上中间载体(从来不用T载体)
15楼2014-07-10 11:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-07-09 08:11:37
以回收的片段为模板,用相同的引物再扩增一次,条带肯定很亮,然后回收!(如果条带不亮,第一次那个暗暗的条带 应该不是你的目的片段)

我还有个小问题想请教一下。我现在回收的目的片段是连完克隆载体后酶切回收的。测序显示有一些位点突变了。那么我按照你的方法扩增,其中突变的点会不会影响我的序列。换句话说pcr扩增完后的序列和我测序回来的序列是一模一样的吗?因为不是很懂所以恳请指点
16楼2014-07-16 15:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-07-07 16:19:56
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

我按照你的方法试过了,的确浓度变高了。非常感谢。只是浓度变高了以后条带却还是偏高。高于我的目的片段500bp。是我胶回收的问题吗?我重新胶回收三次了,结果却都是偏高。做双酶切时还好,回收后就不行了。我一直在用这个连表达载体,始终连不上不知道是不是这个的原因。恳请赐教谢谢
17楼2014-07-16 15:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-08 16:38:50
乙醇沉淀。如果用柱子不能直接上吧,毕竟你的片段溶剂就是洗脱液。

不能直接上柱 啊?是不是 在我回收的目的片段溶液加入乙醇?那我该加多少呢。谢谢
18楼2014-07-16 15:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zixiao_226 at 2014-07-09 08:45:38
可以浓缩下体积,最好是重新扩一次,会好点

我是用回收的目的片段连接表达载体的。克隆载体已经连上了 且测序正确。只是连表达一直连不上。
19楼2014-07-16 15:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

茂林修竹7

金虫 (正式写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:52:03
引用回帖:
16楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-16 15:35:11
我还有个小问题想请教一下。我现在回收的目的片段是连完克隆载体后酶切回收的。测序显示有一些位点突变了。那么我按照你的方法扩增,其中突变的点会不会影响我的序列。换句话说pcr扩增完后的序列和我测序回来的序列 ...

有点不明白你的意思。你说的是克隆载体,是指T-vector吧?这个问题和你最初的问题不是一个吧?不明白你到底想问什么。
根据你测序的结果,有一个碱基突变,如果以此为模板(不考虑Taq酶的错配率),扩出来的pcr片段肯定也会有一个碱基突变的。
另外碱基突变不代表翻译的氨基酸序列的突变,你可以比对下 氨基酸序列,如果正确的话,也是可以用的。
将欲取之必先与之
20楼2014-07-16 17:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 18:38 by imissbao
[考研] 0703化学321分求调剂 +17 三dd. 2026-03-30 18/900 2026-04-05 18:07 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-30 10/500 2026-04-05 17:57 by jj987
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 化学357分,考研调剂 +10 .Starry. 2026-04-04 11/550 2026-04-05 10:57 by cql1109
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +10 梁富贵险中求 2026-04-04 12/600 2026-04-05 09:37 by guoweigw
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 材料专硕322分 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-02 11/550 2026-04-04 23:37 by 永字号
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +39 洛神哥哥 2026-03-31 41/2050 2026-04-03 21:51 by qlm5820
[考研] 285求调剂 +6 FZAC123 2026-03-30 6/300 2026-04-03 12:22 by xingguangj
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +20 Youth_ 2026-03-30 20/1000 2026-04-02 14:48 by 5896
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 【求调剂】新能源材料本科,一志愿211,初试321 +6 求调剂学校, 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
信息提示
请填处理意见