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张冰宝

新虫 (小有名气)

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虫号: 3004363
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性别: MM
专业: 地方病学

[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下谢谢

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1楼 2014-07-07 16:14:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

茂林修竹7

金虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:52:03

引用回帖:

16楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-16 15:35:11
我还有个小问题想请教一下。我现在回收的目的片段是连完克隆载体后酶切回收的。测序显示有一些位点突变了。那么我按照你的方法扩增，其中突变的点会不会影响我的序列。换句话说pcr扩增完后的序列和我测序回来的序列 ...

有点不明白你的意思。你说的是克隆载体，是指T-vector吧？这个问题和你最初的问题不是一个吧？不明白你到底想问什么。
根据你测序的结果，有一个碱基突变，如果以此为模板（不考虑Taq酶的错配率），扩出来的pcr片段肯定也会有一个碱基突变的。
另外碱基突变不代表翻译的氨基酸序列的突变，你可以比对下氨基酸序列，如果正确的话，也是可以用的。