26楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 09:10:37
放到负80干燥？ 这样就会浓度变高吗？...

41楼: Originally posted by xiaohongma at 2014-07-21 14:22:23
-80干燥以后，没有水了，你再少加点水进去不就相当于浓缩了么？你合成的引物不也是要加水稀释么？
...

40楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 14:01:07
是啊 。切得时候没有两千，但是一回收就高。不知道怎么回事？更奇怪的是我同门她切胶回收的也高，但是她就连接上表达载体了，我这个死活连不上。找了n多原因...

43楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-21 14:56:11
那就只说你酶切酶连的问题吧，你不测浓度怎么算摩尔数，不算摩尔数怎么算摩尔比？如果次次都是估算那是很不可靠的。
...

44楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 14:57:48
好的 明白了。非常感谢您的帮助。我在重新试一下...

45楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-21 15:29:24
一般的说明书上 载体0.03pmol  基因0.03pmol-0.3pmol 10ul体系酶连16度12-20小时，也可以扩大体系后二次酶连效果更好，再设置阳性对照检测感受态转化效率就没啥问题了，你以前做转化平板上是啥也没有还是有含空载体 ...

29楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 11:11:54
非常感谢你。是我没说清楚，其实我主要的问题就是你说的第二步。我已经重新提质粒了，质粒浓度还是挺高的，但是酶切回收后浓度就不是很高了，并且还有一个问题，就是我回收的目的条带总是偏高，我已经重新回收三次 ...

47楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-07-21 17:40:29
T-vector的测序结果是正确的，另外建议你还是要检查下 你目的基因5端、3端的酶切位点有没有错误，如果都没有问题的话，酶切目的条带偏高，应该没什么问题，可能是你marker的问题。
还有，酶切回收的浓度 不会很高 ...

47楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-07-21 17:40:29
T-vector的测序结果是正确的，另外建议你还是要检查下 你目的基因5端、3端的酶切位点有没有错误，如果都没有问题的话，酶切目的条带偏高，应该没什么问题，可能是你marker的问题。
还有，酶切回收的浓度 不会很高 ...

49楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-22 10:36:47
我确定了一下 ，还让同门帮看了 设计的引物与酶切位点什么的都是对的。...