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zxlulurain

新虫 (初入文坛)

[求助] CHIP超声条件请各位做过的大神给点建议 已有3人参与

刚刚开始做chip,实验室是sonics VCX130超声破碎仪,探头是2mm的,要破碎的体积大约是200-400ul,细胞是sw1990和panc-1,请各位做过chip的虫友们给出点点子,超声破碎的条件多少功率,冲击几秒,间歇几秒,几个循环比较合理,可以破碎到所需要的DNA片段。
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流连客

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wallen379 at 2014-07-02 23:59:56
做ChIP第一步就是去确定超声的条件,这个具体超声参数肯定是需要自己去摸索的,因为每个人不同的机器和材料以及溶剂就有不同的方法。
以下是我个人总结的一些超声需要注意的事项:
1.片段长度,如果是只做ChIP-PC ...

请问你有没有用过covaris s220的超声仪?实验室按照200bp推荐参数总是得到100左右或100bp以下的片段。
7楼2014-08-07 22:52:55
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zxlulurain(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-19 09:13:31
自己动手丰衣足食
DNA片段以500 bp为主时比较合适。
2楼2014-06-18 16:43:29
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-06-29 17:23:29
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 21:55:33
超声破碎的时间和功率最好自己摸索一下,超声后跑电泳,确保片段的大小集中在500bp-1kb。
根据你超声仪的参数,你可以试试10%功率,打5s停9s,打8-10次。(我的做法是,直接用手拿着,超声2次放到冰上冷一会)
一定要保证不能出现气泡,我的经验是 超声时探头位于离心管的底部,但是不能接触管壁。
将欲取之必先与之
3楼2014-06-29 16:20:28
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by-今夕

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验! 2014-07-15 21:55:20
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 21:55:27
我们这有好像是东芝牌的,300W,超2.5sec,停5sec,超了5min, 条带在300左右。之前借的仪器不知道是什么牌子,用的50%的功率,超了8sec,停30sec,超了10次都没有成功。
4楼2014-06-29 19:57:28
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