24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zxlulurain

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 201.2
帖子: 19
在线: 7.5小时
虫号: 2019866
注册: 2012-09-21
专业: 胰腺外分泌功能异常与胰腺

[求助] CHIP超声条件请各位做过的大神给点建议已有3人参与

刚刚开始做chip，实验室是sonics VCX130超声破碎仪，探头是2mm的，要破碎的体积大约是200-400ul，细胞是sw1990和panc-1，请各位做过chip的虫友们给出点点子，超声破碎的条件多少功率，冲击几秒，间歇几秒，几个循环比较合理，可以破碎到所需要的DNA片段。

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

合成目标产物大神们看看行吗已经有17人回复
急！！大神进来帮忙看一看~~ 伯醇氧化羧酸已经有8人回复
无机化学的大神们好已经有6人回复
投SCI两天后被拒，大神帮我分析下是什么原因已经有23人回复
由二卤卡宾做环丙烷的产率很低有经验的大神帮忙看下啊已经有6人回复
纳米金棒的SiO2包袱，大家给点建议已经有18人回复
一种特殊物质的酰胺缩合反应（分子内还是分子间？）已经有4人回复
氨基与羧基连接反应反应条件？已经有7人回复
伯胺与酮的反应，产率太低，各位大侠给点建议已经有16人回复
氯化银/TiO2的可见光催化几乎没有效果，请给点建议。。。谢谢。。。已经有11人回复
求高手帮忙分析一下NMR和IR谱图，第一次做，无从下手，哪怕进来给点建议也好? 已经有43人回复
【求助】对羟基苯乙醇中试谁能给点建议已经有20人回复
【求助】有谁使用过过氧化氢催化氰基水解？给点建议吧已经有4人回复

1楼 2014-06-18 11:32:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wallen379

新虫 (初入文坛)

MolEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
金币: 11.9
帖子: 4
在线: 1.2小时
虫号: 2256995
注册: 2013-01-23

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+10, 应助指数+1 2014-07-15 21:56:18
gyesang: MolEPI+1, good ! 2014-07-15 21:56:34

做ChIP第一步就是去确定超声的条件，这个具体超声参数肯定是需要自己去摸索的，因为每个人不同的机器和材料以及溶剂就有不同的方法。
以下是我个人总结的一些超声需要注意的事项：
1.片段长度，如果是只做ChIP-PCR的话在200-1000范围内都可以，因为这个长度便于扩增，而ChIP-seq就得在200-500之间，这个范围便于测序。
2.超声功率，你需要做几个梯度（如10%-60%，或100W-400W），从小到大去测试，太小不能充分打断，太大则过度打断，甚至会过热、起泡。如果是宁波东芝的可能不太稳定，我用的是美国BRANSON的，很稳定，40%比较好。
3.超声时间，你需要做几个梯度（如1min-5min），这个是指总时间，不包括间隔。从短到长，道理同上，我的是4分钟。然后一次on的时间，则1s-30s不等，随你所好，关键是不要超久过度产热，会使你的蛋白变性或起泡，因为溶液里有表面活性剂SDS。我的是一次超10秒，on的总时间4分钟（不包括间隔）。
4.间隔时间，目的是让你的之前单次超神产生的热量冷却下来，10s-2min不等，一般不比on的时间短，我的是30s。
5.循环的总数，也就是超声的总时间，包括间隔，你就根据3和4自己算一下吧。
6.注意事项：a 虽然你的探头是最小的2mm，但是我建议你最好体积不要太小，否则探头容易碰壁或离开液面，散热也不够好；b 整个超声过程最好再冰水混合浴中进行，道理如前； c 我个人经验，用1.5ml的Ep管超声不易起泡。
暂时就想到这么多了，欢迎大家指正。