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多糖上DEAE-52纤维柱的洗脱液紫外的测定问题 已有2人参与
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各位虫友，请教几个问题： 先介绍下背景，提取的植物性多糖，过DEAE-52纤维柱，然后用水洗脱，流速1ml/min，每管接10ml，接收了100管，然后进行紫外测定。 1.洗脱下来的洗脱液进行苯酚硫酸法测定吸光度时，你具体是怎么操作的？取多少洗脱液，加多少硫酸和苯酚？这个是要摸索的还是怎么样？有没有一个什么原则？我以前测粗多糖时是取1ml供试品，加5%的苯酚1ml，摇匀，加硫酸5ml，在488nm下测吸光度。还有，测吸光度以后，你将吸光度多少的合并再一起浓缩？吸光度多少算太小，会弃去。 2.我取吸光度1.5以上的收集合并以后，用醇沉淀的方法得多糖，但上样300mg的粗多糖用水洗脱下来的洗脱液用醇沉好像得不到沉淀，请问是一定要用冷冻干燥吗？样品太少是不是不适合用醇沉淀？ |
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