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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 多糖上DEAE-52纤维柱的洗脱液紫外的测定问题
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

[求助] 多糖上DEAE-52纤维柱的洗脱液紫外的测定问题 已有2人参与

各位虫友，请教几个问题：
先介绍下背景，提取的植物性多糖，过DEAE-52纤维柱，然后用水洗脱，流速1ml/min，每管接10ml，接收了100管，然后进行紫外测定。
      1.洗脱下来的洗脱液进行苯酚硫酸法测定吸光度时，你具体是怎么操作的？取多少洗脱液，加多少硫酸和苯酚？这个是要摸索的还是怎么样？有没有一个什么原则？我以前测粗多糖时是取1ml供试品，加5%的苯酚1ml，摇匀，加硫酸5ml，在488nm下测吸光度。还有，测吸光度以后，你将吸光度多少的合并再一起浓缩？吸光度多少算太小，会弃去。
      2.我取吸光度1.5以上的收集合并以后，用醇沉淀的方法得多糖，但上样300mg的粗多糖用水洗脱下来的洗脱液用醇沉好像得不到沉淀，请问是一定要用冷冻干燥吗？样品太少是不是不适合用醇沉淀？
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@@@@@@
1楼 2014-06-11 16:04:09
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mojojo1984

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陶盛昌: 金币+5, ★有帮助 2014-06-14 00:06:26
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-06-14 09:59:41
检测一般取200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸。吸光度在0.1以上就收集，因为这是离子交换柱，同一洗脱浓度洗脱的样品的性质都是一样的，样品少的话醇沉不下来。
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2楼2014-06-12 10:04:31
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mojojo1984 at 2014-06-12 10:04:31
检测一般取200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸。吸光度在0.1以上就收集，因为这是离子交换柱，同一洗脱浓度洗脱的样品的性质都是一样的，样品少的话醇沉不下来。

谢谢！
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@@@@@@
3楼2014-06-14 00:06:34
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mojojo1984 at 2014-06-12 10:04:31
检测一般取200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸。吸光度在0.1以上就收集，因为这是离子交换柱，同一洗脱浓度洗脱的样品的性质都是一样的，样品少的话醇沉不下来。

但是200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸配好以后太少，根本不够比色皿的1/3，测紫外时会不会有影响？另外，前面水洗脱的多糖液我又拿去浓缩了一下，然后醇沉得到了57.6mg,得率为18.9%。
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@@@@@@
4楼2014-06-14 08:36:43
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 陶盛昌 at 2014-06-14 08:36:43
但是200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸配好以后太少，根本不够比色皿的1/3，测紫外时会不会有影响？另外，前面水洗脱的多糖液我又拿去浓缩了一下，然后醇沉得到了57.6mg,得率为18.9%。...

我们也是这么测的，200μL样品，100μL苯酚，1mL硫酸，这个可以用96孔板，然后酶标仪测吸光度。我们一般是把吸光度和洗脱体积做曲线，收集峰就可以了。
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5楼2014-07-14 15:45:20
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-07-15 02:47:21
陶盛昌: 金币+5, ★有帮助 2014-08-08 22:04:52
DEAE你用水洗的话，出来的应该是中性多糖。只是植物多糖的一部分，包括淀粉啊，菊粉之类的，甚至可能有葡聚糖，但植物里面一般还含有果胶类，也就是含有-COOH的酸性多糖，会在柱子上用水洗不下来，我们实验室会先用水洗中性多糖，然后用NaCl梯度洗脱酸性多糖。
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6楼2014-07-14 15:48:45
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等的就是你呀

新虫 (初入文坛)
我们是取200ul，加200ul苯酚加1ml浓硫酸检测的，收集的话是看峰形状去收集，过这个柱子得到东西我觉得超级超级少，不能用醇沉，我觉得醇沉是粗分离吧
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7楼2016-01-18 20:02:33
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