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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液PCR出现奇怪现象，急求大神解释
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moshangchenx

金虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR出现奇怪现象，急求大神解释 已有4人参与

各位大虾，本人在做菌液PCR时出现了一种奇怪现象，在试管中摇菌菌液PCR结果正常，但将该管中的菌液扩大培养后，菌液PCR扩不出目的条带，出现了比目的条带小很多的带，急求大神指点！

菌液PCR出现奇怪现象，急求大神解释
无标题.jpg
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科研无止境，我心成蹉跎
1楼 2014-06-04 16:44:19
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-05 08:44:56
moshangchenx: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-05 09:08:04
菌液PCR很容易出现假阳性，建议用其他方法验证，例如提取质粒后进行PCR验证，也可以用酶切进行验证
另外，扩大培养很有可能污染了
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-06-04 20:00:39
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-05 08:45:03
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-04 20:00:39
菌液PCR很容易出现假阳性，建议用其他方法验证，例如提取质粒后进行PCR验证，也可以用酶切进行验证
另外，扩大培养很有可能污染了

有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-06-04 20:07:58
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-05 08:45:09
moshangchenx: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-05 09:09:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-04 20:07:58
有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题
...

3泳道扩增出来的结果的确有很大的问题。一般菌液PCR是可以扩增出目的条带的，只不过会含有很多杂带，但是特异的那一条带还是有的。不过也不能排除特殊情况，本实验室一般都是粗抽质粒电泳，然后用质粒进行PCR。楼主的扩大培养很有可能出现了污染。
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-04 20:25:15
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-05 08:45:19
还是小体系的提取质粒，然后转化，再加大培养体积，比较好
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5楼2014-06-05 05:40:17
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-05 08:45:23
你的质粒有多大，貌似1、2是质粒，不是扩增产物
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6楼2014-06-05 08:42:07
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-05 08:49:24
moshangchenx: 金币+1, ★有帮助 2014-06-05 09:10:14
估计污染了，最好再加一个不带质粒的菌做PCR,当做阴性对照，
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星陈代谢
7楼2014-06-05 08:46:38
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moshangchenx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-04 20:00:39
菌液PCR很容易出现假阳性，建议用其他方法验证，例如提取质粒后进行PCR验证，也可以用酶切进行验证
另外，扩大培养很有可能污染了

我已经重新转化了，觉得污染的可能性比较大，谢谢
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科研无止境，我心成蹉跎
8楼2014-06-05 09:06:42
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moshangchenx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-04 20:07:58
有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题
...

菌液PCR我是第一次做，所以还是很担心的，呵呵
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科研无止境，我心成蹉跎
9楼2014-06-05 09:07:20
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moshangchenx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-04 20:25:15
3泳道扩增出来的结果的确有很大的问题。一般菌液PCR是可以扩增出目的条带的，只不过会含有很多杂带，但是特异的那一条带还是有的。不过也不能排除特殊情况，本实验室一般都是粗抽质粒电泳，然后用质粒进行PCR。楼主 ...

恩，污染的可能性比较大
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科研无止境，我心成蹉跎
10楼2014-06-05 09:09:46
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