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科研无止境，我心成蹉跎

1楼2014-06-04 16:44:19

西门吹雪170

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moshangchenx: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-05 09:08:04

菌液PCR很容易出现假阳性，建议用其他方法验证，例如提取质粒后进行PCR验证，也可以用酶切进行验证
另外，扩大培养很有可能污染了

植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良

2楼2014-06-04 20:00:39

Neo2000

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-04 20:00:39
菌液PCR很容易出现假阳性，建议用其他方法验证，例如提取质粒后进行PCR验证，也可以用酶切进行验证
另外，扩大培养很有可能污染了

有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题

[ 发自小木虫客户端 ]

3楼2014-06-04 20:07:58

西门吹雪170

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引用回帖:

3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-04 20:07:58
有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题
...

3泳道扩增出来的结果的确有很大的问题。一般菌液PCR是可以扩增出目的条带的，只不过会含有很多杂带，但是特异的那一条带还是有的。不过也不能排除特殊情况，本实验室一般都是粗抽质粒电泳，然后用质粒进行PCR。楼主的扩大培养很有可能出现了污染。

植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良

4楼2014-06-04 20:25:15

meng_xu

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还是小体系的提取质粒，然后转化，再加大培养体积，比较好

5楼2014-06-05 05:40:17

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你的质粒有多大，貌似1、2是质粒，不是扩增产物

6楼2014-06-05 08:42:07

kx444555

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moshangchenx: 金币+1, ★有帮助 2014-06-05 09:10:14

估计污染了，最好再加一个不带质粒的菌做PCR,当做阴性对照，

星陈代谢

7楼2014-06-05 08:46:38

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引用回帖:

我已经重新转化了，觉得污染的可能性比较大，谢谢

科研无止境，我心成蹉跎

8楼2014-06-05 09:06:42

moshangchenx

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3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-04 20:07:58
有可能是他操作不当，菌液PCR检测我们常做的，没有问题
...

菌液PCR我是第一次做，所以还是很担心的，呵呵

科研无止境，我心成蹉跎

9楼2014-06-05 09:07:20

moshangchenx

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4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-04 20:25:15
3泳道扩增出来的结果的确有很大的问题。一般菌液PCR是可以扩增出目的条带的，只不过会含有很多杂带，但是特异的那一条带还是有的。不过也不能排除特殊情况，本实验室一般都是粗抽质粒电泳，然后用质粒进行PCR。楼主 ...

恩，污染的可能性比较大

科研无止境，我心成蹉跎

10楼2014-06-05 09:09:46