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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？
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foxcl

铁虫 (正式写手)

[求助] 反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？ 已有5人参与

色谱条件
缓冲液：3.12 磷酸二氢钠→1000mL水中，磷酸调pH至3.0
流动相A：BP：乙腈＝1：9
流动相B：BP：乙腈＝3：7
检测波长：210nm
进样量：10uL
柱温：25度
梯度如下图1、有机相比例如下图2、结果如下图3：

反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？
1400554632621.jpg


反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？-1
1400554540833.jpg


反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？-2
1400554606337.jpg
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1楼 2014-05-20 11:34:01
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
foxcl(News代发): 金币+1, 感谢回帖交流 2014-05-22 23:57:45
你梯度下降时不要瞬间拉回基点，用5min缓慢降至基点可能会好些，磷酸盐尽量使用色谱纯或者优级纯的，也会好些
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2楼2014-05-20 11:52:08
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2014-05-20 11:52:08
你梯度下降时不要瞬间拉回基点，用5min缓慢降至基点可能会好些，磷酸盐尽量使用色谱纯或者优级纯的，也会好些

磷酸盐我们这边只有分析纯
回基点其实可以缓和些，但是冲洗段的杂质怎么办？
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3楼2014-05-20 13:24:01
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2014-05-20 11:52:08
你梯度下降时不要瞬间拉回基点，用5min缓慢降至基点可能会好些，磷酸盐尽量使用色谱纯或者优级纯的，也会好些

用150mm的短柱是不是可能会好些？
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4楼2014-05-20 13:24:34
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
foxcl(News代发): 金币+1, 感谢回帖交流 2014-05-22 23:57:18
又是末端吸收，又是用缓冲盐的没得救的。想要改善的话只能是缓慢过度，不过这样又不能体现梯度洗脱的省时优势了，慢慢摸摸吧，如果开始的40min没什么峰出现的话直接提高有机相比例，后面可能会平滑点。如果前面确实有峰需要低有机相的话，建议果断换柱子或者改为正相。
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我是超级天后：天天努力，不落人后！
5楼2014-05-20 13:44:14
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voyager88

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by foxcl at 2014-05-20 13:24:01
磷酸盐我们这边只有分析纯
回基点其实可以缓和些，但是冲洗段的杂质怎么办？...

直接降下会出来，缓慢降下也会出来的
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6楼2014-05-20 13:54:49
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2014-05-20 13:44:14
又是末端吸收，又是用缓冲盐的没得救的。想要改善的话只能是缓慢过度，不过这样又不能体现梯度洗脱的省时优势了，慢慢摸摸吧，如果开始的40min没什么峰出现的话直接提高有机相比例，后面可能会平滑点。如果前面确实 ...

哎，我知道210nm波长不太好。关键方法开发的人，定的系统，有一物质在210nm下吸收已经很弱了，提长波长，响应会很低。

如果缓慢过度的话，那一针至少100min了，而且后期梯度峰还是会有的。

前20分钟，我为了省时，从25%的有机相提高到30%了，不能再提了。再提有2个峰就不能分开了。

我再试试用磷酸二氢钾有没有什么不一样的，再改用150mm的色谱柱试试。
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7楼2014-05-20 14:17:46
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by voyager88 at 2014-05-20 13:54:49
直接降下会出来，缓慢降下也会出来的...

是的，只要有机相比例达到一定程度，必然会出来的
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8楼2014-05-20 14:18:18
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voyager88

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by foxcl at 2014-05-20 14:18:18
是的，只要有机相比例达到一定程度，必然会出来的...

我说你70min 从70%不要瞬间将至30%，缓慢下降末尾那个峰（RT=74MIN）就没了，和你前面出不出峰有什么关系？况且前面那些可能是杂峰，不是梯度峰好不好？那些杂峰可能是你磷酸盐、乙腈、和水纯度不够导致的，210mn，很多东西都有末端吸收，东西不纯，色谱柱冲不干净出杂峰在所难免。
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9楼2014-05-20 14:25:38
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主
引用回帖:
7楼: Originally posted by foxcl at 2014-05-20 14:17:46
哎，我知道210nm波长不太好。关键方法开发的人，定的系统，有一物质在210nm下吸收已经很弱了，提长波长，响应会很低。

如果缓慢过度的话，那一针至少100min了，而且后期梯度峰还是会有的。

前20分钟，我为了 ...

再试试好了，祝好运。
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我是超级天后：天天努力，不落人后！
10楼2014-05-20 14:52:25
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