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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 反相色谱 平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
foxcl(News代发): 金币+1, 感谢回帖交流 2014-05-22 23:58:58
你的缓冲盐浓度比较高，pH3.0:乙腈（1:9）会不会有盐析出，如果盐的浓度对分离没太大影响，可以降低浓度（5mmol可以试试）。梯度漂移很常见，引起原因一般是试剂质量不好、管路过滤装置需清洗和混合器混合效果不好、较脏的柱子、检测器光路老化能量不够等，不如你先用根新柱子试试。
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
11楼2014-05-21 09:28:26
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pipwang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“梯度鬼峰”呀
不好消除，因为检测波长210nm，乙腈在210附近有吸收，流动相中乙腈浓度的改变肯定会引起基线的波动
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12楼2014-05-21 11:30:37
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axearmy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
foxcl(News代发): 金币+1, 感谢回帖交流 2014-05-22 23:58:32
foxcl: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-05-25 16:02:01
此为磷酸盐的杂质洗脱峰，为多种杂质在色谱柱中富集，达到一定有机相比例后集中洗脱所致
解决办法：
1.提高梯度起始有机相比例，减少低有机相比例平衡时间。可有限地减小峰高峰面积。
2.采用纯度级别较高的缓冲盐试剂。一般来说，磷酸二氢钾要比磷酸二氢钠杂质少一点。当然，有条件建议使用UG或HPLC级的缓冲盐。
3.梯度放缓可以选择性避开待检测物质，但不能消除杂峰，甚至可能使杂峰变大。
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13楼2014-05-21 16:57:44
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kf1009 at 2014-05-21 09:28:26
你的缓冲盐浓度比较高，pH3.0:乙腈（1:9）会不会有盐析出，如果盐的浓度对分离没太大影响，可以降低浓度（5mmol可以试试）。梯度漂移很常见，引起原因一般是试剂质量不好、管路过滤装置需清洗和混合器混合效果不好、 ...

不是柱 的问题，目前极有可能是分析纯的磷酸盐的问题  已经订购色谱级的    等到货后测试

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14楼2014-05-25 15:57:28
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kf1009 at 2014-05-21 09:28:26
你的缓冲盐浓度比较高，pH3.0:乙腈（1:9）会不会有盐析出，如果盐的浓度对分离没太大影响，可以降低浓度（5mmol可以试试）。梯度漂移很常见，引起原因一般是试剂质量不好、管路过滤装置需清洗和混合器混合效果不好、 ...

已经浓度最高70   不会析出的

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15楼2014-05-25 15:58:37
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by pipwang at 2014-05-21 11:30:37
“梯度鬼峰”呀
不好消除，因为检测波长210nm，乙腈在210附近有吸收，流动相中乙腈浓度的改变肯定会引起基线的波动

有部分是梯度峰，但有几个和主成分峰重合，不管怎么调都有     调完也是和主峰高度重合   可能是杂质的影响的问题

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16楼2014-05-25 16:00:36
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by axearmy at 2014-05-21 16:57:44
此为磷酸盐的杂质洗脱峰，为多种杂质在色谱柱中富集，达到一定有机相比例后集中洗脱所致
解决办法：
1.提高梯度起始有机相比例，减少低有机相比例平衡时间。可有限地减小峰高峰面积。
2.采用纯度级别较高的缓冲盐 ...

起始梯度不能再高了！

现在正在排除磷酸盐杂质的影响

梯度不能太缓   不然系统没法走了

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17楼2014-05-25 16:23:07
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