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foxcl

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[求助] 反相色谱平稳段（洗出段）梯度峰如下降低或消除？已有5人参与

色谱条件
缓冲液：3.12 磷酸二氢钠→1000mL水中，磷酸调pH至3.0
流动相A：BP：乙腈＝1：9
流动相B：BP：乙腈＝3：7
检测波长：210nm
进样量：10uL
柱温：25度
梯度如下图1、有机相比例如下图2、结果如下图3：

1400554632621.jpg

1400554540833.jpg

1400554606337.jpg

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1楼 2014-05-20 11:34:01

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foxcl

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2014-05-20 13:44:14
又是末端吸收，又是用缓冲盐的没得救的。想要改善的话只能是缓慢过度，不过这样又不能体现梯度洗脱的省时优势了，慢慢摸摸吧，如果开始的40min没什么峰出现的话直接提高有机相比例，后面可能会平滑点。如果前面确实 ...

哎，我知道210nm波长不太好。关键方法开发的人，定的系统，有一物质在210nm下吸收已经很弱了，提长波长，响应会很低。

如果缓慢过度的话，那一针至少100min了，而且后期梯度峰还是会有的。

前20分钟，我为了省时，从25%的有机相提高到30%了，不能再提了。再提有2个峰就不能分开了。

我再试试用磷酸二氢钾有没有什么不一样的，再改用150mm的色谱柱试试。