24小时热门版块排行榜    

查看: 1721  |  回复: 10

wbs21cn

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神们可否愿意挑战这个片段的引物设计,真心有点难 已有4人参与

最近设计一个片段的引物,真的好难,求大神们赐招啊。高GC含量,高重复序列。设计了几对出去,都扩不出来
AGCAGTGATAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGCAACAGCAGTGATAGCAGTGAAAGCAGTA
ATAGTAGTGACAACAGCAATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAG
TAATAGTAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAATAGCAGC
GACAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCA
GTGATAGCAGCAACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGTAATAGTAGTGACAG
CAGCAATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGTGAC
AGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTG
ATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGATAGCAGTGAAAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAG
CAATAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCGATAGC
AGTGACAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGATAGCAGTGACA
GCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGTGAAAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGA
CAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGATAGCAGC
GACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGATAGTAGTGATAGCA
GTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAG
CAATGAAAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGCGAC
AGCAGTGATAGCAGTGACAGCACATCTGACAGCAATGATGAGAGTGACAGCCAGAGCAAGTCTGGTAACG
GTAACAACAATGGAAGTGACAGTGACAGTGACAGTGAAGGCAGTGACAGTAACCACTCAACCAGTGATGA
TTAGAACAAAAGAAAAACCCGTAAGATTCCTTTTGTGAAAAGTTT
谢谢各位大神了。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:31:48
F: AGCAGTGATAGCAGCAACAGC
R: AAACTTTTCACAAAAGGAATCTTACGGG
Tm: 61
1208

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-06-24 17:43:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:31:56
wbs21cn: 金币+17 2014-06-27 16:51:55
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-24 17:43:53
F: AGCAGTGATAGCAGCAACAGC
R: AAACTTTTCACAAAAGGAATCTTACGGG
Tm: 61
1208

试试这对,用一个mix做下,DNA模板,退火时间可以延长到一分钟

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-06-24 17:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-16 11:43:32
可用TakaRa的 GC buffer,PCR看看
2楼2014-05-16 11:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-16 11:43:37
你扩增这个片段的目的是啥?需要扩增全长还是扩增其中一个片段?
如果需要扩增全长,构建载体的话,可以试试全合成。
3楼2014-05-16 11:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wbs21cn(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-25 08:31:39
如果这个基因是做表达的话,基因要么从cDNA中克隆获得,要么从已知载体亚克隆获得,如果从已知载体亚克隆获得,引物设计比较随意,不需要特别的设计,只要把ORF包括进去就行,如果没有该基因的模板需要从cDNA里面克隆,有可能会扩不到条带

所以最好是,能找到含有这个基因序列的质粒载体然后再亚克隆到你的目标表达载体上,你可以先从cDNA里面扩增试试,不行的话可以考虑到公司买基因,据我了解的话,买个基因,最低大概可以400-500块钱就可以搞定
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-05-16 12:45:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

真的假的一眼望去就是重复序列,不是拿大家寻开心的吧
问题是你有什么要求?
5楼2014-05-16 15:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wbs21cn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-16 15:59:08
真的假的一眼望去就是重复序列,不是拿大家寻开心的吧
问题是你有什么要求?

折腾了几个月了,还是没有扩出来。没有要求,只要能扩出来。扩出来然后拿去测序的。
6楼2014-06-24 15:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wbs21cn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-16 12:45:00
如果这个基因是做表达的话,基因要么从cDNA中克隆获得,要么从已知载体亚克隆获得,如果从已知载体亚克隆获得,引物设计比较随意,不需要特别的设计,只要把ORF包括进去就行,如果没有该基因的模板需要从cDNA里面克 ...

没那么复杂哈。我们是从血中提取的DNA,然后拿来扩增这个片段。扩出来之后如果有条带就拿去测序。
7楼2014-06-24 15:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wbs21cn

新虫 (初入文坛)

好的,谢谢哈
10楼2014-06-27 16:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wbs21cn 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:25 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 10:52 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 4/200 2026-11-15 10:08 by xSrQNSSjcgoX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:46 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:35 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 4/200 2026-11-15 07:45 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-15 07:23 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 02:48 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 9/450 2026-11-15 02:04 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 10/500 2026-11-15 00:39 by Equinoxhua
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:11 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:46 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 3/150 2026-11-12 08:26 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
请填处理意见