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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大神们可否愿意挑战这个片段的引物设计，真心有点难
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wbs21cn

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神们可否愿意挑战这个片段的引物设计，真心有点难 已有4人参与

最近设计一个片段的引物，真的好难，求大神们赐招啊。高GC含量，高重复序列。设计了几对出去，都扩不出来
AGCAGTGATAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGCAACAGCAGTGATAGCAGTGAAAGCAGTA
ATAGTAGTGACAACAGCAATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAG
TAATAGTAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAATAGCAGC
GACAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCA
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AGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTG
ATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGATAGCAGTGAAAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAG
CAATAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCGATAGC
AGTGACAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGATAGCAGTGACA
GCAGCAACAGCAGTGACAGCAGTGACAGCAGTGAAAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGA
CAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCAATAGCAGTGATAGCAGC
GACAGCAGTGATAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGCGATAGCAGCGACAGCAGCGATAGTAGTGATAGCA
GTGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGACAGCAGTGACAG
CAATGAAAGCAGCGACAGCAGTGACAGCAGCGATAGCAGTGACAGCAGCAACAGCAGTGACAGCAGCGAC
AGCAGTGATAGCAGTGACAGCACATCTGACAGCAATGATGAGAGTGACAGCCAGAGCAAGTCTGGTAACG
GTAACAACAATGGAAGTGACAGTGACAGTGACAGTGAAGGCAGTGACAGTAACCACTCAACCAGTGATGA
TTAGAACAAAAGAAAAACCCGTAAGATTCCTTTTGTGAAAAGTTT
谢谢各位大神了。
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1楼 2014-05-16 10:27:18
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-16 11:43:37
你扩增这个片段的目的是啥？需要扩增全长还是扩增其中一个片段？
如果需要扩增全长，构建载体的话，可以试试全合成。
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3楼2014-05-16 11:39:11
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-16 11:43:32
可用TakaRa的 GC buffer,PCR看看
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2楼2014-05-16 11:36:57
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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wbs21cn(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-25 08:31:39
如果这个基因是做表达的话，基因要么从cDNA中克隆获得，要么从已知载体亚克隆获得，如果从已知载体亚克隆获得，引物设计比较随意，不需要特别的设计，只要把ORF包括进去就行，如果没有该基因的模板需要从cDNA里面克隆，有可能会扩不到条带

所以最好是，能找到含有这个基因序列的质粒载体然后再亚克隆到你的目标表达载体上，你可以先从cDNA里面扩增试试，不行的话可以考虑到公司买基因，据我了解的话，买个基因，最低大概可以400-500块钱就可以搞定
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-05-16 12:45:00
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
真的假的一眼望去就是重复序列，不是拿大家寻开心的吧
问题是你有什么要求？
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5楼2014-05-16 15:59:08
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