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leiqin

新虫 (小有名气)

[求助] 保真性太差,200多的片段有6-7个bp的错配 已有8人参与

请问我该如何提高克隆的保真性?

扩增的目的片段均小于500bp,有的甚至只有200bp多一点,我用的康为的taqmix,结果测序回来后发现226bp的片段错配了6-7个,不同的单克隆,分别错配6个和7个。

不知道如何能够提高保真性。

如果我用taqmix与高保真酶混合,什么样的比例比较合适?另外用什么缓冲液呢?taqmix本身就是酶在缓冲液中,不知道能不能直接将两者混合起来,比例是多少呢?

谢谢各位!
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zep616745243

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
普通Taq酶保真性也没你那么差啊,会不会是模板的问题,有没有多测几个平行组对比下
只有不断地失败才会成功
14楼2014-04-27 16:19:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
循环数不要太多,从cDNA或者基因组中扩,最多30个,质粒中扩25个足矣

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-04-27 17:01:53
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
1

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-27 14:12:54
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-04-27 14:26:55
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4楼2014-04-27 14:27:14
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1
5楼2014-04-27 14:27:50
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-04-27 14:27:55
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
7楼2014-04-27 14:30:52
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
8楼2014-04-27 14:32:44
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
9楼2014-04-27 14:32:58
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
10楼2014-04-27 14:53:29
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