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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配
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leiqin

新虫 (小有名气)

[求助] 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配 已有8人参与

请问我该如何提高克隆的保真性？

扩增的目的片段均小于500bp，有的甚至只有200bp多一点，我用的康为的taqmix,结果测序回来后发现226bp的片段错配了6-7个，不同的单克隆，分别错配6个和7个。

不知道如何能够提高保真性。

如果我用taqmix与高保真酶混合，什么样的比例比较合适？另外用什么缓冲液呢？taqmix本身就是酶在缓冲液中，不知道能不能直接将两者混合起来，比例是多少呢？

谢谢各位！
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1楼 2014-04-27 14:10:33
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zep616745243

银虫 (小有名气)
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普通Taq酶保真性也没你那么差啊，会不会是模板的问题，有没有多测几个平行组对比下
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只有不断地失败才会成功
14楼2014-04-27 16:19:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
循环数不要太多，从cDNA或者基因组中扩，最多30个，质粒中扩25个足矣

[ 发自小木虫客户端 ]
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18楼2014-04-27 17:01:53
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kiss20085537
★
leiqin(金币+1): 谢谢参与
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[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-27 14:12:54
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血性红魔
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leiqin(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-04-27 14:26:55
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天涯sx
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4楼2014-04-27 14:27:14
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xiejf
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5楼2014-04-27 14:27:50
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yaoyao145
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6楼2014-04-27 14:27:55
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火焱哥
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7楼2014-04-27 14:30:52
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冷平武
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8楼2014-04-27 14:32:44
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nzhth
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shenrenren
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