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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
taq mix的保真性不行的  做克隆还是要用高保真酶  我们实验室用的phanta 还挺好用的 你也可以用别的公司的 但是要用高保真酶
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21楼2014-04-27 21:51:08
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-27 16:19:43
普通Taq酶保真性也没你那么差啊，会不会是模板的问题，有没有多测几个平行组对比下

正解！
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22楼2014-04-27 22:30:50
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风吹我已散
23楼2014-04-28 09:04:17
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邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用Etaq还有标配的buffer，dNTP，多做几组，有几组序列错误也是正常的
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不是不能，只是不想
24楼2014-04-28 10:05:08
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leiqin(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:55:30
扩增小于500 bp片段，常规Taq酶一般不会出现那么多的错配的。如果要求保真性比较高的话，建议采用pfu酶，pfu酶的PCR产物时平末端，如果你进行的TA克隆的话，需要加A，或者采用专门的平末端连接试剂盒。
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rainwater
25楼2014-04-28 11:38:32
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半月琴zzu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接用高保真酶进行pcr呗，你是要有什么用途啊？要是只是检测的话那不是用taq就可以吗
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26楼2014-04-28 13:32:42
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么要把taq和高保真的酶混合用呢？直接用高保真性的酶p就好了。用HiFi或者KOD都还挺好的
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27楼2014-04-28 16:53:20
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过之前也有用普通的taq做过，也还好
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28楼2014-04-28 16:54:09
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你体系如何，如果循环太多，dNTP浓度不够，即便是高保真的酶也会出问题，还是要调整体系，普通的taq在1KB以内一般都没有问题，除非你的模板不对。
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29楼2014-04-29 08:13:35
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蓝皮鼠7983
30楼2014-04-29 08:39:11
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