应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配
343/4返回列表上一页1234下一页
查看: 1571  |  回复: 33
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
taq mix的保真性不行的  做克隆还是要用高保真酶  我们实验室用的phanta 还挺好用的 你也可以用别的公司的 但是要用高保真酶
赞一下 回复此楼
21楼2014-04-27 21:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-27 16:19:43
普通Taq酶保真性也没你那么差啊，会不会是模板的问题，有没有多测几个平行组对比下

正解！
回复此楼
22楼2014-04-27 22:30:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散
23楼2014-04-28 09:04:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用Etaq还有标配的buffer，dNTP，多做几组，有几组序列错误也是正常的
赞一下 回复此楼
不是不能，只是不想
24楼2014-04-28 10:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leiqin(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:55:30
扩增小于500 bp片段，常规Taq酶一般不会出现那么多的错配的。如果要求保真性比较高的话，建议采用pfu酶，pfu酶的PCR产物时平末端，如果你进行的TA克隆的话，需要加A，或者采用专门的平末端连接试剂盒。
赞一下 回复此楼
rainwater
25楼2014-04-28 11:38:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半月琴zzu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接用高保真酶进行pcr呗，你是要有什么用途啊？要是只是检测的话那不是用taq就可以吗
赞一下 回复此楼
26楼2014-04-28 13:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么要把taq和高保真的酶混合用呢？直接用高保真性的酶p就好了。用HiFi或者KOD都还挺好的
赞一下 回复此楼
27楼2014-04-28 16:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过之前也有用普通的taq做过，也还好
赞一下 回复此楼
28楼2014-04-28 16:54:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你体系如何，如果循环太多，dNTP浓度不够，即便是高保真的酶也会出问题，还是要调整体系，普通的taq在1KB以内一般都没有问题，除非你的模板不对。
赞一下 回复此楼
29楼2014-04-29 08:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝皮鼠7983
30楼2014-04-29 08:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 leiqin 的主题更新
343/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭