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我爱科学2012

木虫 (正式写手)

[求助] 基因敲除中,阳性克隆抗生素最低致死浓度(即阳性克隆筛选浓度)的确定!!!!!! 已有2人参与

如题,本人在做酵母的基因敲除实验,但是苦于对抗生素最低致死浓度的确定,不知道怎么确定。就是说对野生株某种抗生素(如G418,Zeocin等)最低致死浓度(就是后续的抗生素抗性筛选浓度),这个是怎么确定的?

我的做法是:将菌种挑取单菌落培养至对数期后,取100微升涂布在 几个含抗生素浓度梯度的平板上面,之后放在30度培养,没有形成单菌落的平板对应的抗生素浓度就是最低致死浓度,最后将此浓度作为后续的抗生素抗性筛选浓度。  

不知道这样做对不对?大家是怎么做的。谢谢各位的指教!!!!!
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eaeas12

禁虫 (初入文坛)

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3楼2014-06-24 22:56:56
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凌枫miracle

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我爱科学2012: 金币+2, 有帮助 2014-05-03 12:54:28
个人愚见,你可以在第一次浓度确定min之后,在最低浓度左右附近再设置个浓度梯度,这样可以使最低值更加精确。毕竟,分子实验更加需要严谨,而不是只是一般的工艺优化!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-23 13:04:46
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