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lrm407

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 间接法免疫荧光细胞染色如何重新标记荧光? 已有2人参与

做免疫荧光细胞染色,用DAPI染细胞核,用抗体标记检测蛋白。放置一段时间后重新观察,DAPI颜色还在,检测蛋白的荧光消失。现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察,需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗?需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊?可否直接加一抗和二抗标记观察?谢谢!
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lrm407

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-22 12:12:18
你染完没有加防淬灭剂吗?最近也在做,放了三天,目的蛋白的荧光看了一下还在。抗荧光淬灭封片液用的是碧云天的,大片子每次加10ul就够了,觉得挺好的。如果目的蛋白荧光弱,DAPI最好少加并且时间短一些,DAPI太强容 ...

谢谢,没遇到你这种现象,染完多用缓冲液冲洗一下看看。不好意思,我问的是“现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察,需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗?需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊?可否直接加一抗和二抗标记观察?”------不知你有没有这方面的经验!
3楼2014-04-22 14:55:32
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lrm407(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-22 13:22:15
你染完没有加防淬灭剂吗?最近也在做,放了三天,目的蛋白的荧光看了一下还在。抗荧光淬灭封片液用的是碧云天的,大片子每次加10ul就够了,觉得挺好的。如果目的蛋白荧光弱,DAPI最好少加并且时间短一些,DAPI太强容易影响目的蛋白荧光。还想请教你一个问题,我染DAPI的时候核不是一片蓝而是一块一块的,你有没有这种现象呢?
2楼2014-04-22 12:12:18
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kueradi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lrm407 at 2014-04-22 14:55:32
谢谢,没遇到你这种现象,染完多用缓冲液冲洗一下看看。不好意思,我问的是“现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察,需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗?需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊?可否直接加一 ...

这个还没遇到过,所以没经验了。
4楼2014-04-22 15:07:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lrm407: 金币+2 2014-04-23 14:43:08
没做个从新染色的,但是好的商品化的抗淬灭剂能保持一个1个月以上
5楼2014-04-23 11:15:46
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