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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 间接法免疫荧光细胞染色如何重新标记荧光？
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lrm407

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 间接法免疫荧光细胞染色如何重新标记荧光？ 已有2人参与

做免疫荧光细胞染色，用DAPI染细胞核，用抗体标记检测蛋白。放置一段时间后重新观察，DAPI颜色还在，检测蛋白的荧光消失。现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察，需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗？需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊？可否直接加一抗和二抗标记观察？谢谢！
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1楼 2014-04-22 11:32:58
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lrm407(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-22 13:22:15
你染完没有加防淬灭剂吗？最近也在做，放了三天，目的蛋白的荧光看了一下还在。抗荧光淬灭封片液用的是碧云天的，大片子每次加10ul就够了，觉得挺好的。如果目的蛋白荧光弱，DAPI最好少加并且时间短一些，DAPI太强容易影响目的蛋白荧光。还想请教你一个问题，我染DAPI的时候核不是一片蓝而是一块一块的，你有没有这种现象呢？
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2楼2014-04-22 12:12:18
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lrm407

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-22 12:12:18
你染完没有加防淬灭剂吗？最近也在做，放了三天，目的蛋白的荧光看了一下还在。抗荧光淬灭封片液用的是碧云天的，大片子每次加10ul就够了，觉得挺好的。如果目的蛋白荧光弱，DAPI最好少加并且时间短一些，DAPI太强容 ...

谢谢，没遇到你这种现象，染完多用缓冲液冲洗一下看看。不好意思，我问的是“现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察，需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗？需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊？可否直接加一抗和二抗标记观察？”------不知你有没有这方面的经验！
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3楼2014-04-22 14:55:32
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kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lrm407 at 2014-04-22 14:55:32
谢谢，没遇到你这种现象，染完多用缓冲液冲洗一下看看。不好意思，我问的是“现打算重新用抗体标记检测蛋白进行观察，需要将之前标记的抗体洗去再重新抗体标记吗？需要的话应该怎么洗去之前的抗体啊？可否直接加一 ...

这个还没遇到过，所以没经验了。
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4楼2014-04-22 15:07:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lrm407: 金币+2 2014-04-23 14:43:08
没做个从新染色的，但是好的商品化的抗淬灭剂能保持一个1个月以上
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5楼2014-04-23 11:15:46
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lrm407

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-23 11:15:46
没做个从新染色的，但是好的商品化的抗淬灭剂能保持一个1个月以上

谢谢
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6楼2014-04-23 14:43:13
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