24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

明德2013

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1136.3
散金: 168
红花: 2
帖子: 35
在线: 38.9小时
虫号: 2668728
注册: 2013-09-21
性别: GG
专业: 基因组学

[求助] 70bp PAGE 已有3人参与

各位，我PCR扩增出来的是大约70bp的双链DNA，那我想跑胶检测有没有把它扩增出来，那我应该用变性尿素聚丙烯酰胺凝胶，还是非变性的？求各位高手指教

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

90bp小片段的回收已经有16人回复
miRNA 跑agrose gel， ethidium bromide，为什么看不到亮带？求助谢谢！！！已经有7人回复
请问两个关于denature PAGE的问题~ 已经有7人回复
pcr产物问题请教大家已经有5人回复
【交流】核酸的精准分离方法已经有5人回复

独有英雄驱虎豹，更无豪杰怕熊罴。

1楼 2014-04-17 08:44:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 1998.9
红花: 3
帖子: 328
在线: 193.4小时
虫号: 492008
注册: 2008-01-07
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
明德2013(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-19 13:38:03

看你这片段大小，是不是要做RNAi表达质粒啊？建议不要PCR扩增，直接找引物合成的公司合成两条互补单链就行，两条单链5‘末端留出酶切位点接头（比如你5’端要用EcoRI的位点连接GAATTC，在你的序列前直接加入AATTC），不是酶切位点哦！两条单链合成后溶解，上PCR仪94度变性，60度退火，4度保存就可以用了，因为你加入的是酶的overhang，所以不需要再用酶切割，质粒切好了直接连接就可以。如果只是需要70n的oligo，不加酶切overhang，拿来直接annealing也很方便，因为这么小的片段，跟引物二聚体差不多，小于100bp的片段，纯化也够你受的。