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明德2013铁虫 (初入文坛)
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| 各位，我PCR扩增出来的是大约70bp的双链DNA，那我想跑胶检测有没有把它扩增出来，那我应该用变性尿素聚丙烯酰胺凝胶，还是非变性的 ？ 求各位高手指教 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
明德2013(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-19 13:38:03
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明德2013(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-19 13:38:03
| 看你这片段大小，是不是要做RNAi表达质粒啊？建议不要PCR扩增，直接找引物合成的公司合成两条互补单链就行，两条单链5‘末端留出酶切位点接头（比如你5’端要用EcoRI的位点连接GAATTC，在你的序列前直接加入AATTC），不是酶切位点哦！两条单链合成后溶解，上PCR仪94度变性，60度退火，4度保存就可以用了，因为你加入的是酶的overhang，所以不需要再用酶切割，质粒切好了直接连接就可以。如果只是需要70n的oligo，不加酶切overhang，拿来直接annealing也很方便，因为这么小的片段，跟引物二聚体差不多，小于100bp的片段，纯化也够你受的。 |
7楼2014-04-18 22:54:01
Neo2000
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2楼2014-04-17 12:28:21
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3楼2014-04-17 19:26:13
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4楼2014-04-17 19:42:48
