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明德2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 70bp PAGE 已有3人参与

各位，我PCR扩增出来的是大约70bp的双链DNA，那我想跑胶检测有没有把它扩增出来，那我应该用变性尿素聚丙烯酰胺凝胶，还是非变性的 ？ 求各位高手指教
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独有英雄驱虎豹，更无豪杰怕熊罴。
1楼 2014-04-17 08:44:00
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑个1.5%以上的琼脂糖胶就可以啊

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2楼2014-04-17 12:28:21
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明德2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-17 12:28:21
跑个1.5%以上的琼脂糖胶就可以啊

琼脂糖凝胶能分离出来吗，条带会不会不清楚，谢谢
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独有英雄驱虎豹，更无豪杰怕熊罴。
3楼2014-04-17 19:26:13
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 明德2013 at 2014-04-17 19:26:13
琼脂糖凝胶能分离出来吗，条带会不会不清楚，谢谢...

可以跑出来的，没问题的

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4楼2014-04-17 19:42:48
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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明德2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-19 13:37:49
70bp可以用3%的agarose试试。
其实配PAGE更简单。6%的native PAGE就够了。泡EB里染色。最多半分钟就够了。当然也取决于你EB浓度。

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5楼2014-04-18 00:34:25
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明德2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-18 00:34:25
70bp可以用3%的agarose试试。
其实配PAGE更简单。6%的native PAGE就够了。泡EB里染色。最多半分钟就够了。当然也取决于你EB浓度。

哦 谢了！PAGE 配胶挺麻烦的 ，我用琼脂糖试试吧   谢谢您了
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独有英雄驱虎豹，更无豪杰怕熊罴。
6楼2014-04-18 22:20:32
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mascotte

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
明德2013(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-19 13:38:03
看你这片段大小，是不是要做RNAi表达质粒啊？建议不要PCR扩增，直接找引物合成的公司合成两条互补单链就行，两条单链5‘末端留出酶切位点接头（比如你5’端要用EcoRI的位点连接GAATTC，在你的序列前直接加入AATTC），不是酶切位点哦！两条单链合成后溶解，上PCR仪94度变性，60度退火，4度保存就可以用了，因为你加入的是酶的overhang，所以不需要再用酶切割，质粒切好了直接连接就可以。如果只是需要70n的oligo，不加酶切overhang，拿来直接annealing也很方便，因为这么小的片段，跟引物二聚体差不多，小于100bp的片段，纯化也够你受的。
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7楼2014-04-18 22:54:01
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