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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 还是HPLC问题
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虫子驾到

银虫 (小有名气)

[求助] 还是HPLC问题 已有2人参与

今天发现一个比较奇怪的现象，我用乙腈/0.2%三乙胺水溶液跑两个标准品，随着水相比例的增大，不仅出峰时间后移，而且两个峰高都随着变小，不知道大侠们如何解释这个现象？
        还有就是，我怀疑我的柱子被冲坏了，每次调流动相比例的时候，压力变化都比之前慢很多，但是最后也能达到正常值，哪位大侠有这方面的经验，能否帮忙确认一些呢？
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1楼 2014-04-16 16:01:41
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浮尘灬邂逅

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

随着水的比例增大，流动相极性变大，洗脱能力变弱，出峰时间边长，之前叠到一起的峰会分开导致峰面积减小，但是并不见得会导致峰展宽。加入三乙胺的作用是为了抑制拖尾，对极性没有什么影响。
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做自己习惯的事
4楼2014-04-22 17:05:45
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
虫子驾到: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-16 19:25:13
辣笔v小新: 金币+2, 鼓励应助交流 2014-04-16 20:31:07
对于第一个问题：推测你的柱子是C18或者C8柱，使用的是反相色谱法，C18或者C8属于非极性固定性，你的流动相由乙腈-0.2%三乙胺构成，目标化合物是非极性或者弱极性，你说三乙胺比例增加，那就是说流动相极性增加，根据相似相容原理，你的目标化合物被流动相冲洗出柱子变慢，出峰自然就变慢了啊。出峰时间后移，峰高变小，必然峰宽变宽，柱效下降。不知道你是做含量还是有关物质，含量的话，一般主成分保留时间控制在10min以内就可以，有关物质的话尽量让杂质都分离出来，分离度较好，主成分的柱效不用考虑太多。
对于第二个问题：调整流动相比例，柱压慢慢上升才是正常的，柱子不会那么容易坏，冲柱子或者走样品之前先询问购买柱子厂商的工程师，询问注意事项，当然你也可以看看柱子的使用说明书。评判柱子是否坏了，你可以进一个对照品，并与你最初进这个对照品的出峰时间，理论塔板数，对称因子等比较。
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生命不息，奋斗不止
2楼2014-04-16 16:45:15
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虫子驾到

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 喵喵与咩咩 at 2014-04-16 16:45:15
对于第一个问题：推测你的柱子是C18或者C8柱，使用的是反相色谱法，C18或者C8属于非极性固定性，你的流动相由乙腈-0.2%三乙胺构成，目标化合物是非极性或者弱极性，你说三乙胺比例增加，那就是说流动相极性增加，根 ...

谢谢这么详尽的解释啊。
    我用的是C18柱，目标物中有一个是生物碱，所以要用三乙胺防拖尾。原来以为流动相比例的改变只会引起出峰时间的改变，没想到还会引起峰高的大小，今天受教啦
    做的中药的含量测定，十分钟之内有较多的杂质峰，影响到生物碱的出峰，所以想把水的比例调高点，分开些。但是水相比例调高，导致第二个目标物的峰高太低（本身含量较低），所以比较头疼。
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3楼2014-04-16 17:09:38
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