17楼: Originally posted by lingsheshidu at 2014-04-14 21:45:44
那就是酶切效率的问题了，可能保护碱基加的少或者不合适，因为PCR产物直接酶切构建载体确实不如先连接T载体容易，原因就是如果保护碱基加的少酶切效率还是较低的。如果你认为保护碱基加的没问题，而且酶切以后也经 ...

20楼: Originally posted by 赵晓楠zxn at 2014-04-15 10:58:23
我的载体回收浓度为6.6ng/ul，目的片段浓度为8.2ng/ul，用的20ul 反应体系，载体加10ul，目的片段加4ul。   
如果按你所说的质粒回收浓度在30ng/ul ，片段10ng/ul ，你是用多大的反应体系呢，载体和片段各加多少u ...

23楼: Originally posted by owl2010 at 2014-04-26 16:11:33
这两个都可以控制。有个简单的公式可以算  片段需要加的浓度为=（片段大小/载体片段大小）X摩尔比（3到10 推荐到10）X载体的浓度
比如，我片段500bp，载体5000bp，质粒浓度30ng。我可以加1ul 2ui 3ul 都没有问题  ...

2楼: Originally posted by for5 at 2014-04-12 20:57:42
没长菌算是坏事中的好事，至少没有假阳性，那就调整比例多连几次吧。继续转。
T载体那是因为连接效率高，需要用taq酶进行PCR，是目的基因两端加A，但是同时质量不好的T载体容易形成自连，也就导致假阳性