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bjgymilyxz木虫 (小有名气)
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免疫荧光目的蛋白定位异常 已有1人参与
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各位亲，本人最近做细胞爬片的免疫荧光染色，得到了如下图片，但是不知道为什么目的蛋白定位异常，请教各位大虾。我养的前体脂肪细胞，梭形的，一抗是abcam的兔抗人的多抗，二抗分别是Alexa 488标记的绿色。检测的目的蛋白应该定位在细胞质，但是，我的前后2次染色结果不同，一次是大部分定位于细胞质，后一次则大部分出现在细胞核，不知道哪里出了问题，请给我赐教！！ 具体染色步骤：1. 3.7% 多聚甲醛 15min; 2. 0.1% Trion-X 10min; 3. 10% Normal Serum 30 min, 4. 1抗 4度 14-16 h; 5. 2抗 室温 1 h; 6. Hoechst 10min 第1张图片目的蛋白的绿色荧光出现在细胞质和细胞核，以胞核为主；第2张图片的目的蛋白以胞浆为主。 为什么同一个蛋白在同一种细胞中做出的荧光结果，有的是以胞核为主，而有的又是以胞浆为主呢，abcam的说明书显示目的蛋白定位于细胞质的。  这张目的蛋白的绿色荧光出现在细胞质和细胞核，以胞核为主  后面这张图片的目的蛋白以胞浆为主。 |
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