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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫荧光目的蛋白定位异常
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 免疫荧光目的蛋白定位异常 已有1人参与

各位亲，本人最近做细胞爬片的免疫荧光染色，得到了如下图片，但是不知道为什么目的蛋白定位异常，请教各位大虾。我养的前体脂肪细胞，梭形的，一抗是abcam的兔抗人的多抗，二抗分别是Alexa 488标记的绿色。检测的目的蛋白应该定位在细胞质，但是，我的前后2次染色结果不同，一次是大部分定位于细胞质，后一次则大部分出现在细胞核，不知道哪里出了问题，请给我赐教！！
具体染色步骤：1. 3.7% 多聚甲醛 15min;
2. 0.1% Trion-X 10min;
3. 10% Normal Serum 30 min,
4. 1抗 4度 14-16 h;
5. 2抗 室温 1 h;
6. Hoechst 10min

第1张图片目的蛋白的绿色荧光出现在细胞质和细胞核，以胞核为主；第2张图片的目的蛋白以胞浆为主。
为什么同一个蛋白在同一种细胞中做出的荧光结果，有的是以胞核为主，而有的又是以胞浆为主呢，abcam的说明书显示目的蛋白定位于细胞质的。

免疫荧光目的蛋白定位异常
这张目的蛋白的绿色荧光出现在细胞质和细胞核，以胞核为主


免疫荧光目的蛋白定位异常-1
后面这张图片的目的蛋白以胞浆为主。
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因为喜欢，所以担忧，所以后退
1楼 2014-04-04 15:51:03
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DL_nvwu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bjgymilyxz at 2014-04-04 20:49:22
查询了一些资料，初步怀疑如果实验结果没有问题的话，可能是目的蛋白发生转位了。
没办法，只好重新做一次看看...

目的蛋白发生转位是因为什么？怎么避免
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欢迎学术交流，共同进步
4楼2017-11-27 20:53:29
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是细胞状态不同导致你的目的蛋白细胞定位不同，你有查这方面的有关资料么？
另外，建议再做一次实验，当两次实验结果不同时，尝试第三次，看看是什么结果，再可以下结论了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-04 15:55:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-04 15:55:48
会不会是细胞状态不同导致你的目的蛋白细胞定位不同，你有查这方面的有关资料么？
另外，建议再做一次实验，当两次实验结果不同时，尝试第三次，看看是什么结果，再可以下结论了。

查询了一些资料，初步怀疑如果实验结果没有问题的话，可能是目的蛋白发生转位了。
没办法，只好重新做一次看看
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因为喜欢，所以担忧，所以后退
3楼2014-04-04 20:49:22
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