24小时热门版块排行榜    

查看: 4469  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zxz91

铜虫 (小有名气)

[求助] 原代心肌成纤维细胞如何传代培养 已有1人参与

取新生3日龄乳鼠获得心肌成纤维细胞后,细胞生长缓慢,大约5d呈融合状态,此时用0.25%胰酶消化大约1min,传代培养,但感觉细胞消化过了,想请问一下详细的传代过程,如何能使细胞活力最佳
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxz91

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘大 at 2014-04-02 13:37:12
我也在培养原代心肌细胞,还是用成年鼠。(只培养,不传代),很难活啊。请问您是怎么提取细胞的?用什么浓度胰酶什么温度,消化多久?太难了,拜求!!!!

我用的是0.25%的胰酶加0.02的EDTA,每次消化时间大约20s,直接在超净台内振荡消化,每次消化时间应根据实际情况,在振荡颜色变浑后终止
3楼2014-04-11 14:42:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

刘大

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在培养原代心肌细胞,还是用成年鼠。(只培养,不传代),很难活啊。请问您是怎么提取细胞的?用什么浓度胰酶什么温度,消化多久?太难了,拜求!!!!
2楼2014-04-02 13:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cf1201

新虫 (初入文坛)

我原先也一直对于原代心肌成纤维细胞的传代头疼不已,我换用了不同的消化方式,不同的胰酶,现在终于看见了一点曙光。我现在的传代的方法是细胞PBS冲洗2-3次,加入1ml胰酶(康宁,个人认为在心肌成纤维细胞传代过程中胰酶这个是最重要的),轻摇胰酶使胰酶铺满整个培养瓶底,消化10s,吸尽胰酶,用残留在瓶底的胰酶继续消化,关瓶口,在镜下观察细胞,待大部分细胞变圆变亮,迅速加入3-4ml培养液终止消化,用吸管或枪头轻轻吹打瓶底,尽量不要产生气泡,最后将培养液分别等分放入两个新的培养瓶中。从加入胰酶开始到加入培养基终止消化的时间在1min左右。如果细胞培养瓶瓶底未消化的细胞较多,可以继续在原培养瓶中培养细胞。个人意见,仅供参考。
4楼2017-12-26 19:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 24/1200 2026-08-16 10:16 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见