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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 原代心肌成纤维细胞如何传代培养
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zxz91

铜虫 (小有名气)

[求助] 原代心肌成纤维细胞如何传代培养 已有1人参与

取新生3日龄乳鼠获得心肌成纤维细胞后，细胞生长缓慢，大约5d呈融合状态，此时用0.25%胰酶消化大约1min，传代培养，但感觉细胞消化过了，想请问一下详细的传代过程，如何能使细胞活力最佳
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1楼 2014-03-27 10:28:09
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刘大

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在培养原代心肌细胞，还是用成年鼠。（只培养，不传代),很难活啊。请问您是怎么提取细胞的？用什么浓度胰酶什么温度，消化多久？太难了，拜求！！！！
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2楼2014-04-02 13:37:12
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zxz91

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘大 at 2014-04-02 13:37:12
我也在培养原代心肌细胞，还是用成年鼠。（只培养，不传代),很难活啊。请问您是怎么提取细胞的？用什么浓度胰酶什么温度，消化多久？太难了，拜求！！！！

我用的是0.25%的胰酶加0.02的EDTA，每次消化时间大约20s，直接在超净台内振荡消化，每次消化时间应根据实际情况，在振荡颜色变浑后终止
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3楼2014-04-11 14:42:44
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cf1201

新虫 (初入文坛)
我原先也一直对于原代心肌成纤维细胞的传代头疼不已，我换用了不同的消化方式，不同的胰酶，现在终于看见了一点曙光。我现在的传代的方法是细胞PBS冲洗2-3次，加入1ml胰酶（康宁，个人认为在心肌成纤维细胞传代过程中胰酶这个是最重要的），轻摇胰酶使胰酶铺满整个培养瓶底，消化10s，吸尽胰酶，用残留在瓶底的胰酶继续消化，关瓶口，在镜下观察细胞，待大部分细胞变圆变亮，迅速加入3-4ml培养液终止消化，用吸管或枪头轻轻吹打瓶底，尽量不要产生气泡，最后将培养液分别等分放入两个新的培养瓶中。从加入胰酶开始到加入培养基终止消化的时间在1min左右。如果细胞培养瓶瓶底未消化的细胞较多，可以继续在原培养瓶中培养细胞。个人意见，仅供参考。
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4楼2017-12-26 19:23:48
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