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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相色谱
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wsyhlj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱 已有3人参与

今天做实验遇到了两个诡异事件，求帮忙解释一下
1、我检测的目标物质是多菌灵和吡虫啉，用20%甲醇酸溶剂溶解，甲醇溶解后0.1mol/lHCl 的酸定容的。进样检测只能检测到吡虫啉，检测不到多菌灵。。。一开始用甲醇水溶解的标样，两者都可以检测到的，可是后来多菌灵就检测不到了，不知道是怎么回事？
另外就是用酸液做溶剂可以吗？
2、拿标准品（多菌灵和吡虫啉的混合标样）上C18固相萃取小柱，用不同比例的丙酮水溶液淋洗，收集；然后用甲醇洗脱，收集。将淋洗液和洗脱液进高效液相色谱检测，我要的目标物质（多菌灵和吡虫啉）均未出峰，只有丙酮一个大峰。。。这是怎么回事？目标物哪去了呢？
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1楼 2014-03-26 21:34:34
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wsyhlj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2014-03-27 20:53:27
你是用液相还是液质来做多菌灵和吡虫啉的？这两个东西的检测波长不一样啊 多菌灵是282nm 吡虫啉是260nm 不出峰很有可能啊

做的液相，检测波长取的两者吸收都比较大的波长
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5楼2014-03-27 21:31:29
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zhuxudong82

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suruiqin: 金币+5, 辛苦了，欢迎常来分析版交流~ 2014-03-27 09:36:47
wsyhlj: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-27 21:06:21
先说第1个问题：
1.1 酸做溶液可以，但是不必要，二者都可以溶解于乙腈中，不知道你使用的什么流动相，其实可以尝试一下，如果流动相能溶解，以流动相定容检测会更好；
1.2 多菌灵需要低温避光保存，如果是同一份多菌灵溶液，开始能检测到，后来检测不到了，不排除目标物分解的可能性，毕竟不知道你使用的浓度，一般来说，浓度越低的标品，稳定性越差；
1.3 如果是新配制的溶液，多菌灵就没出峰，查找原因就相对麻烦一些，可以首先看看是否系统的问题，即不接色谱柱，只进多菌灵单标，如果出峰，再找色谱柱或流动相的原因；如果不出峰，则是系统的问题，很可能检测器方面的问题，比如波长设置是否有误，或者氘灯寿命到了等其它原因；
再就是第2个问题，常见的可能有以下几种：
2.1 所使用的C18封尾不好或者金属含量较高，其酸性会比较强，对目标物形成了死吸附，毕竟多菌灵和吡虫啉碱性都较强；
2.2 还有一种可能是上样溶剂不合适，导致目标物未能在C18上吸附住，上样时已经流走了；
2.3 洗脱强度不够，可以尝试乙腈洗脱或者5%氨化甲醇洗脱。
2.4 原因查找时，建议使用标样查找，首先看看上样过程，把上样流出液进液相，如果出峰了，说明上样液强度过大（比如20%甲醇上样）或者C18保留不够，如果是前者，可以考虑改用水上样，如果是后者，可以考虑使用阳离子交换小柱；
2.5 如果上样流出液不出峰，说明样品还在小柱上，尝试乙腈洗脱或者5%氨化甲醇洗脱，这二者的洗脱力都强于甲醇；
2.6 这种原因的查找也简单，3支C18小柱，平行上样，上样液保留备测，3支小柱淋洗后（或者不淋洗，毕竟是为了排查上样和洗脱这两步），分别以甲醇、乙腈和5%甲醇洗脱，总共6分溶液（3个上样流出液，3个洗脱液）先后进样检测，1次实验就可以分析清楚了。

你提供的信息偏少，而且不具体，也没有量化的数据，不好判断，只能做以上推测，供你参考，祝实验顺利。最后，不知道是自己做方法还是检测，按说多菌灵和吡虫啉的检测都有文献和标准可以参考，农业部标准、国标都有。
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朱旭东
2楼2014-03-27 08:37:55
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wsyhlj: 金币+1 2014-03-27 21:31:42
你是用液相还是液质来做多菌灵和吡虫啉的？这两个东西的检测波长不一样啊 多菌灵是282nm 吡虫啉是260nm 不出峰很有可能啊
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3楼2014-03-27 20:53:27
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wsyhlj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhuxudong82 at 2014-03-27 08:37:55
先说第1个问题：
1.1 酸做溶液可以，但是不必要，二者都可以溶解于乙腈中，不知道你使用的什么流动相，其实可以尝试一下，如果流动相能溶解，以流动相定容检测会更好；
1.2 多菌灵需要低温避光保存，如果是同一份 ...

你在这方面是行家啊！给力啊，多多指教啊
1、我最终都会用流动相定容样品，流动相用的甲醇水。之所以用甲醇酸溶解样品上样，是考虑穿透，讨论最佳上样溶剂。
2、多菌灵后来又检测到了，应该是柱效不知道怎么的降低了，出峰时间晚了近5分钟
3、我就是拿标准品做的固相萃取柱讨论淋洗液，5%甲醇水做上样溶剂，甲醇洗脱，这两个之前就讨论好的没有问题，讨论不同比例的丙酮水淋洗，做淋洗曲线，保留了淋洗液和洗脱液，结果进样检测，都没检测到。。
4、我检测的是烟草，样品前处理不好弄，基质太复杂，你在这方面有经验吗？指点一下啊
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4楼2014-03-27 21:29:05
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