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高效液相色谱 已有3人参与
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今天做实验遇到了两个诡异事件，求帮忙解释一下 1、我检测的目标物质是多菌灵和吡虫啉，用20%甲醇酸溶剂溶解，甲醇溶解后0.1mol/lHCl 的酸定容的。进样检测只能检测到吡虫啉，检测不到多菌灵。。。一开始用甲醇水溶解的标样，两者都可以检测到的，可是后来多菌灵就检测不到了，不知道是怎么回事？ 另外就是用酸液做溶剂可以吗？ 2、拿标准品（多菌灵和吡虫啉的混合标样）上C18固相萃取小柱，用不同比例的丙酮水溶液淋洗，收集；然后用甲醇洗脱，收集。将淋洗液和洗脱液进高效液相色谱检测，我要的目标物质（多菌灵和吡虫啉）均未出峰，只有丙酮一个大峰。。。这是怎么回事？目标物哪去了呢？ |
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zhuxudong82
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【答案】应助回帖
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wsyhlj: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-27 21:06:21
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先说第1个问题： 1.1 酸做溶液可以，但是不必要，二者都可以溶解于乙腈中，不知道你使用的什么流动相，其实可以尝试一下，如果流动相能溶解，以流动相定容检测会更好； 1.2 多菌灵需要低温避光保存，如果是同一份多菌灵溶液，开始能检测到，后来检测不到了，不排除目标物分解的可能性，毕竟不知道你使用的浓度，一般来说，浓度越低的标品，稳定性越差； 1.3 如果是新配制的溶液，多菌灵就没出峰，查找原因就相对麻烦一些，可以首先看看是否系统的问题，即不接色谱柱，只进多菌灵单标，如果出峰，再找色谱柱或流动相的原因；如果不出峰，则是系统的问题，很可能检测器方面的问题，比如波长设置是否有误，或者氘灯寿命到了等其它原因； 再就是第2个问题，常见的可能有以下几种： 2.1 所使用的C18封尾不好或者金属含量较高，其酸性会比较强，对目标物形成了死吸附，毕竟多菌灵和吡虫啉碱性都较强； 2.2 还有一种可能是上样溶剂不合适，导致目标物未能在C18上吸附住，上样时已经流走了； 2.3 洗脱强度不够，可以尝试乙腈洗脱或者5%氨化甲醇洗脱。 2.4 原因查找时，建议使用标样查找，首先看看上样过程，把上样流出液进液相，如果出峰了，说明上样液强度过大（比如20%甲醇上样）或者C18保留不够，如果是前者，可以考虑改用水上样，如果是后者，可以考虑使用阳离子交换小柱； 2.5 如果上样流出液不出峰，说明样品还在小柱上，尝试乙腈洗脱或者5%氨化甲醇洗脱，这二者的洗脱力都强于甲醇； 2.6 这种原因的查找也简单，3支C18小柱，平行上样，上样液保留备测，3支小柱淋洗后（或者不淋洗，毕竟是为了排查上样和洗脱这两步），分别以甲醇、乙腈和5%甲醇洗脱，总共6分溶液（3个上样流出液，3个洗脱液）先后进样检测，1次实验就可以分析清楚了。 你提供的信息偏少，而且不具体，也没有量化的数据，不好判断，只能做以上推测，供你参考，祝实验顺利。最后，不知道是自己做方法还是检测，按说多菌灵和吡虫啉的检测都有文献和标准可以参考，农业部标准、国标都有。 |
2楼2014-03-27 08:37:55
lifucheng
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8楼2014-04-08 21:08:50
zhuxudong82
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1. 上样溶液是酸化甲醇吗？C18保留不住吧？有没有测试一下上样流出的溶液，如果上样流出的溶液中有多菌灵，就是没保留住，这一步有时候也会因为浓度低未检出，不知道你的上样体积是多少，如果大的话，可以氮气吹干，复溶到200-1000ul进样，峰会更明显——如果就是C18没保留住而直接穿透的话； 2. 出峰时间晚了，首先考察是否流速有变化，如果流速无变化，也可能是色谱柱的问题，还有一种可能是流动相比例变了（不知道楼主用的那款仪器和何种混合方式）； 3. 淋洗液和洗脱液都没检测到的话，可以先考察上样流出液，如果上样流出液也没有。而且样品浓度不是太低的话（较低浓度时，淋洗液未检出有可能是稀释到方法检出限以下了，如果是这种情况，简单的方式是提高上样液浓度10倍以上再考察）——如果确定是死吸附，或者请供货商换活性更低的C18，或者增强洗脱液强度； 4. 没做过烟草。楼主不会做的是新鲜烟叶吧？如果是那样的话，除叶绿素之类的比较麻烦，用石墨化碳/NH2柱对除叶绿素等有色杂质和酸性杂质会很有效。 |
9楼2014-04-12 22:14:39
10楼2014-12-01 14:50:06
