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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 用于DNA提取的材料如何在-80℃保存
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 用于DNA提取的材料如何在-80℃保存已有2人参与

各位大虾：我是做原生动物分子的，现在想尝试用-80℃保存分子材料以备后续提取DNA只用。但是之前没有操作过，有些细节问题希望高手指点一二：
1、材料放在-80℃冷冻之前需要预冷或者是其他的预处理吗？还是直接放在-80就行？
2、使用普通EP管可以吗？
3、从-80取出的材料要如何解冻对DNA的损伤最小呢？
多谢指点！感激不尽！
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1楼2014-03-22 10:38:11
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-23 10:05:39
用液氮先迅速冷冻，再保存在-80里
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hehe
2楼2014-03-22 15:47:17
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-22 15:47:17
用液氮先迅速冷冻，再保存在-80里

请问必须用液氮预处理吗？因为我实验量很小，实验室也没有现成的液氮，所以想看能不能把液氮处理这一步给省了
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3楼2014-03-22 20:41:07
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-03-22 20:41:07
请问必须用液氮预处理吗？因为我实验量很小，实验室也没有现成的液氮，所以想看能不能把液氮处理这一步给省了...

这一步可以省，
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hehe
4楼2014-03-22 21:13:59
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lanhaizhixin

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-22 15:47:17
用液氮先迅速冷冻，再保存在-80里

都液氮-170度了，再转-80的原因是？

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-03-23 01:11:23
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lanhaizhixin at 2014-03-23 01:11:23
都液氮-170度了，再转-80的原因是？
...

迅速冷冻保证材料中核酸的完整性防止被降解
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hehe
6楼2014-03-23 08:38:56
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梅子清酒

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-23 10:05:37
柠檬可乐星: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-23 10:06:00
可以直接省略液氮放在-80的。关键是你的材料是什么啊？一般的植物材料的话拿出来提DNA之前还是需要用液氮研磨的啊。所以要想损伤小，研磨之前的准备工作要充足，尽量拿出来就可以直接研磨提取了
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7楼2014-03-23 09:17:26
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅子清酒 at 2014-03-23 09:17:26
可以直接省略液氮放在-80的。关键是你的材料是什么啊？一般的植物材料的话拿出来提DNA之前还是需要用液氮研磨的啊。所以要想损伤小，研磨之前的准备工作要充足，尽量拿出来就可以直接研磨提取了

您好！我做的是原生动物，单个个体平均300um，平时我提DNA就直接把单个体磨碎了提的，像这么小的个体，-80冷冻完的解冻是不是就不用那么麻烦呢？
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8楼2014-03-23 10:04:51
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梅子清酒

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-03-23 10:04:51
您好！我做的是原生动物，单个个体平均300um，平时我提DNA就直接把单个体磨碎了提的，像这么小的个体，-80冷冻完的解冻是不是就不用那么麻烦呢？...

原生动物的提取有它自己的一套方法的，具体的你可以去查阅一些相关文献。大部分文献里都是拿新鲜的液体用酶消化，因为原生动物个体太小，按你之前的单个个体磨碎了提可能会存在没有完全碾磨的情况。不过，如果你之前能提出来，那就还是可以的。
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9楼2014-03-24 09:50:14
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 梅子清酒 at 2014-03-24 09:50:14
原生动物的提取有它自己的一套方法的，具体的你可以去查阅一些相关文献。大部分文献里都是拿新鲜的液体用酶消化，因为原生动物个体太小，按你之前的单个个体磨碎了提可能会存在没有完全碾磨的情况。不过，如果你之 ...

嗯 好的  我先试试吧  谢啦
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10楼2014-03-25 10:38:50
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