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夏天的普洱茶木虫 (著名写手)
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扩全长选walking还是RACE? 已有2人参与
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| 最近根据N端保守区和中间一个保守区域扩增出一个大约700bp的片段，比对后发现是我要的酶，现在想扩增全长，查了些资料后，不知道该选哪个方法，请虫友们给个建议。我的菌是细菌，现在知道5‘端的700个碱基，具体全序列有多长还不知道，查了些资料说可以用genome walking或者race，这两种选哪一个比较好呢？ |
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由于你是原核的，所以获得cDNA的全长序列和基因所在的全长基因组序列是一样的 你这个问题的本质就是你需要扩增你已知的700bp序列的侧翼序列，即所谓的genome walking 由已知序列扩未知序列，方法有很多 常用的有iPCR，adaptor-PCR，Tail-PCR，个人经验iPCR配合nested PCR成功率比较高 |
8楼2014-03-20 20:08:37
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7楼2014-03-20 19:20:55
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